معلومة

هل المواد المسببة للحساسية لها أوجه تشابه بنيوية مع مسببات الأمراض؟

هل المواد المسببة للحساسية لها أوجه تشابه بنيوية مع مسببات الأمراض؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

التفسير الشائع للحساسية هو أن الجهاز المناعي يخلط بين مسببات الحساسية ومسببات الأمراض ويتفاعل معها على هذا النحو. هل هناك أي ميزة لهذا التفسير؟ إذا كان الأمر كذلك ، فإنني أتوقع أنه سيكون من الممكن التنبؤ بالبروتينات التي قد تكون مسببة للحساسية من خلال تشابهها الهيكلي مع مسببات الأمراض. فعلا؟ إذا لم يكن الأمر كذلك ، فكيف يمكننا أن نفسر أي البروتينات تسبب الحساسية وأيها ليست كذلك؟


علم الأحياء 171

بنهاية هذا القسم ، ستكون قادرًا على القيام بما يلي:

  • وصف الهيكل الخلوي
  • قارن أدوار الخيوط الدقيقة والخيوط الوسيطة والأنابيب الدقيقة
  • قارن وقارن بين الأهداب والسوط
  • لخص الاختلافات بين مكونات الخلايا بدائية النواة والخلايا الحيوانية والخلايا النباتية

إذا كنت ستقوم بإزالة جميع العضيات من الخلية ، فهل سيكون غشاء البلازما والسيتوبلازم هما المكونان الوحيدان المتبقيان؟ لا. داخل السيتوبلازم ، لا يزال هناك أيونات وجزيئات عضوية ، بالإضافة إلى شبكة من ألياف البروتين التي تساعد في الحفاظ على شكل الخلية ، وتأمين بعض العضيات في مواقع محددة ، والسماح للسيتوبلازم والحويصلات بالتحرك داخل الخلية ، وتمكين الخلايا داخل الكائنات متعددة الخلايا للتحرك. بشكل جماعي ، يطلق العلماء على هذه الشبكة من ألياف البروتين الهيكل الخلوي. هناك ثلاثة أنواع من الألياف داخل الهيكل الخلوي: الخيوط الدقيقة ، والخيوط الوسيطة ، والأنابيب الدقيقة ((الشكل)). هنا ، سوف نفحص كل منها.


الميكروفيلامين

من بين الأنواع الثلاثة لألياف البروتين في الهيكل الخلوي ، فإن الألياف الدقيقة هي الأضيق. تعمل في الحركة الخلوية ، ويبلغ قطرها حوالي 7 نانومتر ، وتتألف من خيطين متشابكين من البروتين الكروي ، نسميهما أكتين ((الشكل)). لهذا السبب ، نسمي أيضًا الخيوط الدقيقة خيوط الأكتين.


يعمل ATP على تمكين الأكتين لتجميع شكله الخيطي ، والذي يعمل كمسار لحركة البروتين الحركي الذي نسميه الميوسين. يمكّن هذا الأكتين من الانخراط في الأحداث الخلوية التي تتطلب الحركة ، مثل انقسام الخلايا في الخلايا حقيقية النواة والتدفق السيتوبلازمي ، وهو سيتوبلازم الخلية & # 8217 s الحركة الدائرية في الخلايا النباتية. الأكتين والميوسين وفير في خلايا العضلات. عندما تنزلق خيوط الأكتين والميوسين عن بعضها البعض ، تنقبض عضلاتك.

توفر الألياف الدقيقة أيضًا بعض الصلابة والشكل للخلية. يمكنهم إزالة البلمرة (التفكيك) والإصلاح بسرعة ، وبالتالي تمكين الخلية من تغيير شكلها والتحرك. تستفيد خلايا الدم البيضاء (خلايا الجسم التي تقاوم العدوى) من هذه القدرة. يمكنهم الانتقال إلى موقع الإصابة وبلعمة العامل الممرض.

لمشاهدة مثال على خلية دم بيضاء تعمل ، شاهد خلايا الدم البيضاء تطارد البكتيريا لفترة زمنية قصيرة للخلية التي تلتقط نوعين من البكتيريا. يبتلع أحدهما ثم ينتقل إلى الآخر.

المتوسطة الشعيرات

تتكون العديد من خيوط البروتينات الليفية التي يتم لفها معًا من خيوط وسيطة ((الشكل)). تحصل عناصر الهيكل الخلوي على اسمها من حقيقة أن قطرها ، من 8 إلى 10 نانومتر ، يقع بين تلك الموجودة في الألياف الدقيقة والأنابيب الدقيقة.


الخيوط الوسيطة ليس لها دور في حركة الخلية. وظيفتها هيكلية بحتة. إنها تتحمل التوتر ، وبالتالي تحافظ على شكل الخلية ، وتثبت النواة والعضيات الأخرى في مكانها. يوضح (الشكل) كيف تنشئ الخيوط الوسيطة سقالات داعمة داخل الخلية.

الخيوط الوسيطة هي المجموعة الأكثر تنوعًا من عناصر الهيكل الخلوي. توجد عدة أنواع من البروتينات الليفية في الخيوط الوسيطة. ربما تكون أكثر دراية بالكيراتين ، وهو البروتين الليفي الذي يقوي شعرك وأظافرك وبشرة البشرة.

أنابيب مجهرية

كما يوحي اسمها ، الأنابيب الدقيقة عبارة عن أنابيب مجوفة صغيرة. البلمرة الثنائيات من α-tubulin و β-tubulin ، وهما بروتينان كرويان ، يتألفان من جدران الأنابيب الدقيقة & # 8217s ((الشكل)). يبلغ قطرها حوالي 25 نانومتر ، والأنابيب الدقيقة عبارة عن هياكل خلوية ومكونات # 8217 أوسع. إنها تساعد الخلية على مقاومة الانضغاط ، وتوفر مسارًا تنتقل فيه الحويصلات عبر الخلية ، وتسحب الكروموسومات المضاعفة إلى الأطراف المتقابلة للخلية المنقسمة. مثل الميكروفيلامين ، يمكن للأنابيب الدقيقة أن تتفكك وتصلح بسرعة.


الأنابيب الدقيقة هي أيضًا العناصر الهيكلية للسوط ، والأهداب ، والمريكزات (الأخيرة هي الجسيم المركزي & # 8217s وهما جسمان متعامدان). في الخلايا الحيوانية ، الجسيم المركزي هو مركز تنظيم الأنابيب الدقيقة. في الخلايا حقيقية النواة ، تختلف الأسواط والأهداب تمامًا من الناحية الهيكلية عن نظيراتها في بدائيات النوى ، كما نناقش أدناه.

فلاجيلا وأهداب

السوط (المفرد = السوط) عبارة عن هياكل طويلة تشبه الشعر تمتد من غشاء البلازما وتمكن الخلية بأكملها من التحرك (على سبيل المثال ، الحيوانات المنوية ، يوجلينا، وبعض بدائيات النوى). عند وجودها ، تحتوي الخلية على سوط واحد فقط أو عدد قليل من الأسواط. ومع ذلك ، عندما تكون الأهداب (المفرد = الهدب) موجودة ، فإن العديد منها يمتد على طول غشاء البلازما & # 8217s كامل السطح. وهي عبارة عن هياكل قصيرة شبيهة بالشعر تحرك خلايا كاملة (مثل الباراميسيا) أو مواد على طول السطح الخارجي للخلية (على سبيل المثال ، أهداب الخلايا التي تبطن قناتي فالوب التي تحرك البويضة نحو الرحم ، أو أهداب تبطن خلايا الجهاز التنفسي التي تحبس الجسيمات وتحركها نحو أنفك.)

على الرغم من الاختلافات في الطول والعدد ، تشترك الأسواط والأهداب في ترتيب هيكلي مشترك للأنابيب الدقيقة يسمى "مصفوفة 9 + 2". هذا اسم مناسب لأن سوطًا واحدًا أو هدبًا مصنوعًا من حلقة من تسعة أزواج من الأنابيب الدقيقة ، تحيط بمزدوج أنبوب صغير واحد في المركز ((الشكل)).


لقد أكملت الآن مسحًا واسعًا لمكونات الخلايا بدائية النواة وحقيقية النواة. للحصول على ملخص للمكونات الخلوية في الخلايا بدائية النواة وحقيقية النواة ، انظر (الشكل).

مكونات الخلايا بدائية النواة وحقيقية النواة
مكون الخلية وظيفة موجود في بدائيات النوى؟ موجود في الخلايا الحيوانية؟ موجود في الخلايا النباتية؟
غشاء بلازمي يفصل الخلية عن البيئة الخارجية يتحكم في مرور الجزيئات العضوية والأيونات والماء والأكسجين والنفايات داخل وخارج الخلية نعم نعم نعم
السيتوبلازم يوفر ضغط انتفاخ للخلايا النباتية كسوائل داخل موقع الفجوة المركزية للعديد من وسط التفاعلات الأيضية التي توجد فيها العضيات نعم نعم نعم
النواة منطقة مظلمة داخل النواة حيث يتم تصنيع الوحدات الفرعية الريبوسومية. لا نعم نعم
نواة عضية الخلية التي تحتوي على الحمض النووي وتوجه تخليق الريبوسومات والبروتينات لا نعم نعم
الريبوسومات تخليق البروتين نعم نعم نعم
الميتوكوندريا إنتاج ATP / التنفس الخلوي لا نعم نعم
بيروكسيسومات يؤكسد وبالتالي يكسر الأحماض الدهنية والأحماض الأمينية ، وإزالة السموم لا نعم نعم
الحويصلات والفراغات تخزين ونقل وظيفة الجهاز الهضمي في الخلايا النباتية لا نعم نعم
جسيم مركزي دور غير محدد في انقسام الخلايا في مصدر الأنابيب الدقيقة للخلايا الحيوانية في الخلايا الحيوانية لا نعم لا
الجسيمات المحللة هضم الجزيئات الكبيرة وإعادة تدوير العضيات البالية لا نعم بعض
جدار الخلية حماية ودعم هيكلي وصيانة شكل الخلية نعم ، ببتيدوجليكان في المقام الأول لا نعم ، السليلوز في المقام الأول
البلاستيدات الخضراء البناء الضوئي لا لا نعم
الشبكة الأندوبلازمية يعدل البروتينات ويصنع الدهون لا نعم نعم
جهاز جولجي يقوم بتعديل وفرز ووسم وحزم وتوزيع الدهون والبروتينات لا نعم نعم
الهيكل الخلوي يحافظ على شكل الخلية ، ويؤمن العضيات في مواقع محددة ، ويسمح للسيتوبلازم والحويصلات بالتحرك داخل الخلية ، ويمكّن الكائنات أحادية الخلية من التحرك بشكل مستقل نعم نعم نعم
الأسواط الحركة الخلوية بعض بعض لا ، باستثناء بعض خلايا الحيوانات المنوية النباتية
أهداب الحركة الخلوية ، وحركة الجسيمات على طول غشاء البلازما والسطح خارج الخلية رقم 8217 ، والترشيح بعض بعض لا

ملخص القسم

يحتوي الهيكل الخلوي على ثلاثة أنواع مختلفة من عناصر البروتين. من الأضيق إلى الأوسع ، هي الخيوط الدقيقة (خيوط الأكتين) ، والخيوط الوسيطة ، والأنابيب الدقيقة. غالبًا ما يربط علماء الأحياء الخيوط الدقيقة بالميوسين. أنها توفر الصلابة والشكل للخلية وتسهل الحركات الخلوية. تحمل الخيوط الوسيطة التوتر وتثبت النواة والعضيات الأخرى في مكانها. تساعد الأنابيب الدقيقة الخلية على مقاومة الانضغاط ، وتعمل كمسارات للبروتينات الحركية التي تحرك الحويصلات عبر الخلية ، وتسحب الكروموسومات المضاعفة إلى الأطراف المتقابلة للخلية المنقسمة. هم أيضًا العنصر الهيكلي للمريكزات والسوط والأهداب.

إستجابة مجانية

ما هي أوجه التشابه والاختلاف بين هياكل المريكزات والسوط؟

المريكزات والسواطير متشابهتان من حيث أنها تتكون من الأنابيب الدقيقة. في المريكزات ، حلقتان من تسعة أنابيب دقيقة "ثلاثة توائم" مرتبة بزوايا قائمة لبعضها البعض. هذا الترتيب لا يحدث في الأسواط.

كيف تختلف الأهداب والسوط؟

تتشابه الأهداب والسوط من حيث أنها تتكون من الأنابيب الدقيقة. الأهداب هي هياكل قصيرة شبيهة بالشعر توجد بأعداد كبيرة وعادة ما تغطي كامل سطح غشاء البلازما. على النقيض من ذلك ، فإن فلاجيلا عبارة عن هياكل طويلة تشبه الشعر عند وجود الأسواط ، وتحتوي الخلية على واحد أو اثنين فقط.

صف كيف تشارك الألياف الدقيقة والأنابيب الدقيقة في البلعمة وتدمير العامل الممرض بواسطة البلاعم.

تبتلع البلاعم العامل الممرض عن طريق إعادة ترتيب خيوطها الدقيقة من الأكتين لثني غشاء البلازما حول العامل الممرض. بمجرد إغلاق العامل الممرض في جسيم داخلي داخل البلاعم ، تمشي الحويصلة على طول الأنابيب الدقيقة حتى تتحد مع الجسيم الجسيمي لهضم العامل الممرض.

قارن وعارض الحدود التي تستخدمها الخلايا النباتية والحيوانية والبكتيرية لفصل نفسها عن البيئة المحيطة بها.

تحتوي جميع أنواع الخلايا الثلاثة على غشاء بلازما يحد السيتوبلازم من جانبه الداخلي. في الخلايا الحيوانية ، يكون الجانب الخارجي من غشاء البلازما على اتصال بالبيئة خارج الخلية. ومع ذلك ، في الخلايا النباتية والبكتيرية ، يحيط جدار الخلية الجزء الخارجي من غشاء البلازما. في النباتات ، يتكون جدار الخلية من السليلوز ، بينما في البكتيريا يتكون جدار الخلية من الببتيدوغليكان. تحتوي البكتيريا سالبة الجرام أيضًا على كبسولة إضافية مصنوعة من عديدات السكاريد الدهنية التي تحيط بجدارها الخلوي.

قائمة المصطلحات


يشترك البشر والنباتات في مسار تنظيمي مشترك

في النتائج التي قد يجدها البعض تذكرنا بالخيال العلمي ، أظهر العلماء في معهد سكريبس للأبحاث لأول مرة أن البشر والنباتات يشتركون في مسار مشترك للتعرف على مسببات الأمراض كجزء من أجهزتهم المناعية الفطرية. يمكن أن تساعد البيانات في إلقاء ضوء جديد على كيفية عمل بروتينات التعرف على العوامل الممرضة والدور الذي تلعبه في بعض الأمراض الالتهابية المزمنة.

تقدم الدراسة دليلاً جديدًا على أن Nod1 ، وهو عضو في عائلة بروتين Nod-like Receptor (NLR) ، يتم تنشيطه بواسطة البروتين SGT1 ، الذي ينشط أيضًا بروتينات المقاومة (R) في النباتات R تحمي البروتينات النباتات من مسببات الأمراض المختلفة. تؤكد الدراسة أيضًا على أوجه التشابه البنيوية بين بروتين Nod1 ، والذي يلعب دورًا محوريًا في التعرف على الجهاز المناعي الفطري والاستجابة للعدوى البكتيرية وأفراد عائلة بروتين R.

قال ريتشارد أوليفيتش ، عالم أبحاث سكريبس الذي أجرى مختبره الدراسة: "كان هناك قدر كبير من التكهنات بأن بروتينات R و Nod1 مرتبطان ، لكن دراستنا توفر أول رابط مباشر بين النباتات والبشر". "النباتات لديها مستقبلات تشبه العقدة واستجابات مناعية مماثلة للبكتيريا ومسببات الأمراض الأخرى - تطورت بروتينات R لمواجهة هذه التأثيرات المسببة للأمراض. توفر دراستنا منظورًا جديدًا لمسار Nod1 في خلايا الثدييات بالإضافة إلى قيمة الاعتماد على الدراسات النباتية من مسارات بروتين R لفهم وظائف التعرف على العوامل الممرضة لهذه البروتينات بشكل أفضل. "

تتعرف بروتينات Nod على البكتيريا الغازية ، وبالتحديد البنى التحتية المتميزة الموجودة في الكائنات الحية سالبة الجرام وإيجابية الجرام. بمجرد تنشيطه ، ينتج Nod1 عددًا من الاستجابات التي تشمل تنشيط مسارات الإشارات داخل الخلايا ، وإنتاج السيتوكين والاستماتة أو موت الخلايا المبرمج. على الرغم من أنه تم وصف نماذج مختلفة من تنشيط Nod1 ، إلا أنه لم يُعرف الكثير عن البروتينات الأخرى التي قد تؤثر على تنشيط البروتين. في المقابل ، تم ربط عدد من البروتينات الإضافية بمسارات تنشيط بروتين R في النباتات.

قال أوليفيتش: "لعائلة NLR صلات واضحة بالأمراض التي تصيب الإنسان". "من بين أكثر من 20 بروتينًا في عائلة NLR ، ترتبط العديد من الطفرات بالأمراض التي تنطوي على التهاب مزمن أو عواقب المناعة الذاتية. حتى الآن ، كان هناك فهم محدود للمسارات التنظيمية لـ Nod1. من خلال تحديد SGT1 باعتباره إيجابيًا البروتين التنظيمي ، تقدم دراستنا رؤى جديدة للعائلة بأكملها. "

SGT1 هو بروتين موجود في الخمائر والنباتات والثدييات في كل من النواة والعصارة الخلوية. يعمل في العديد من العمليات البيولوجية من خلال التفاعل مع مجمعات مختلفة متعددة البروتينات. تشير مجموعة كبيرة من الأدلة أيضًا إلى أن البروتين يلعب دورًا في تنظيم مقاومة مسببات الأمراض في النباتات. حددت الدراسات الجينية المختلفة SGT1 كمكون حاسم لمقاومة مسببات الأمراض في النباتات من خلال تنظيم التعبير وأنشطة بعض بروتينات R

على الرغم من وجود تقاطع جيني كبير بين النباتات والثدييات ، لا يُعرف سوى القليل جدًا عن هذا المسار التنظيمي المشترك بين الإنسان والنبات. تكهن Ulevitch بأن بعض الهياكل التنظيمية للبروتين قد توجد في كل من النباتات والبشر لمجرد أنهم يفعلون نفس الشيء بالطريقة نفسها.

وقال: "في الواقع ، لا توجد سوى طرق عديدة لإنجاز الاستجابات البيولوجية ذات الصلة".

أظهرت الدراسة أيضًا أن بروتين الصدمة الحرارية ، HSP90 ، ساعد في استقرار Nod1.

قال Ulevitch "منع HSP90 أدى إلى انخفاض كبير في مستويات بروتين Nod1". "يشير ذلك بوضوح إلى أن هذا البروتين يلعب دورًا رئيسيًا في استقرار Nod1 وحمايته من التدهور. في المقابل ، فإن إيقاف تشغيل SGT1 لم يغير مستويات Nod1."

في دراسة سابقة ، أفاد مختبر Ulevitch أن Nod1 تفاعل أيضًا مع مجمع COP9 ، وهو مركب متعدد البروتينات معروف بأنه يلعب دورًا في عدد من مسارات التطور في النباتات وله نظير من الثدييات. أشار Ulevitch إلى أن هذا التفاعل يوفر رابطًا ثانيًا بين Nod1 ومسارات البروتين النباتي R.

وأضاف أن "ارتباط Nod1 بمركب SGT1 ومركب COP9 يشير إلى أن أحد الأدوار المحتملة لـ SGT1 يمكن أن يكون استهداف البروتينات المنظمة للمقاومة من أجل التحلل". "في هذه الفرضية ، سيكون البروتين المستهدف منظمًا سلبيًا للاستجابات المناعية."

قال Ulevitch إن الدراسات المستقبلية ستركز على الأدبيات الواسعة الموجودة التي تصف المناعة المعتمدة على البروتين R في النباتات لفهم مسارات NLR البشرية بشكل أفضل ، خاصة تلك التي تعتمد على Nod1.

تم دعم الدراسة من قبل المعاهد الوطنية للصحة ونوفارتيس. نُشرت الدراسة في نسخة إلكترونية مسبقة من وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم خلال أسبوع 9 أبريل 2007.

المؤلفون الآخرون للدراسة ، "SGT1 ضروري لتنشيط NOD1" ، هم جان دا سيلفا كوريا وإيفون ميراندا ونيكي ليونارد.

مصدر القصة:

المواد المقدمة من معهد سكريبس للبحوث. ملاحظة: يمكن تعديل المحتوى حسب النمط والطول.


بيولوجيا الخلية للربو

تحدث المظاهر السريرية للربو بسبب انسداد المسالك الهوائية الموصلة للرئة. هناك نوعان من خلايا مجرى الهواء مهمان للإصابة بالربو: الخلايا الظهارية وخلايا العضلات الملساء. تعمل الخلايا الظهارية في مجرى الهواء ، وهي خط الدفاع الأول ضد مسببات الأمراض والجزيئات المستنشقة ، على إحداث التهاب في مجرى الهواء وتنتج المخاط ، وهو عامل مهم يساهم في انسداد مجرى الهواء. السبب الرئيسي الآخر لانسداد مجرى الهواء هو تقلص العضلات الملساء في مجرى الهواء. قدمت الأساليب التجريبية التكميلية التي تشمل الخلايا المستنبتة والنماذج الحيوانية والدراسات السريرية البشرية العديد من الأفكار حول الآليات المتنوعة التي تساهم في أمراض الخلايا العضلية الملساء والظهارية في مجرى الهواء في هذا المرض المعقد.

مقدمة

الربو مرض شائع يصيب ما يصل إلى 8٪ من الأطفال في الولايات المتحدة (مورمان وآخرون ، 2007) وهو سبب رئيسي للإصابة بالأمراض في جميع أنحاء العالم. المظاهر السريرية الرئيسية للربو هي نوبات متكررة من ضيق التنفس والصفير التي يمكن عكسها جزئيًا على الأقل ، والسعال المتكرر ، وزيادة إفراز المخاط في مجرى الهواء. نظرًا لأن الربو ينطوي على استجابة متكاملة في الممرات الهوائية الموصلة للرئة لمحفزات معروفة أو غير معروفة ، فهو مرض متعدد الخلايا يتضمن استجابات غير طبيعية للعديد من أنواع الخلايا المختلفة في الرئة (Locksley ، 2010). نركز هنا على نوعي الخلايا المسئولين في النهاية عن الأعراض المرضية الرئيسية في الربو - الخلايا الظهارية التي تبدأ التهاب مجرى الهواء في الربو وهي مصدر مخاط مجرى الهواء الزائد ، وخلايا العضلات الملساء التي تنقبض بشكل مفرط لتسبب ضيق مجرى الهواء المصحوب بأعراض. إن التفكير الحالي في الاتصالات بين الخلايا والخلايا التي تؤدي إلى الإصابة بالربو (الشكل 1) هو أن المنبهات المستنشقة المعروفة وغير المعروفة (مثل البروتياز والمكونات الأخرى لمسببات الحساسية المستنشقة ، وفيروسات الجهاز التنفسي ، وملوثات الهواء) تحفز الخلايا الظهارية في مجرى الهواء لإفراز السيتوكينات TSLP ، إنترلوكين (IL) -25 ، و IL-33 ، التي تعمل على الخلايا التغصنية تحت الظهارة ، والخلايا البدينة ، والخلايا اللمفاوية الفطرية (iLCs) لتجنيد كل من الخلايا المكونة للدم الفطرية والتكيفية والبدء في إطلاق السيتوكينات التائية المساعدة 2 (Th2) (بشكل أساسي IL-5 و IL-13 Locksley، 2010 Scanlon and McKenzie، 2012 Bando et al.، 2013 Barlow et al.، 2013 Nussbaum et al.، 2013). تعمل المنبهات البيئية أيضًا على تنشيط الأعصاب الواردة في ظهارة مجرى الهواء والتي يمكن أن تطلق بدورها وسطاء ببتيد نشط بيولوجيًا وأيضًا تحفز التحرر الانعكاسي للأستيل كولين من الألياف الصادرة في العصب المبهم. يتم تضخيم هذه الاستجابة الأولية من خلال تجنيد وتمييز مجموعات فرعية من الخلايا التائية التي تحافظ على إفراز هذه السيتوكينات وفي بعض الحالات تفرز سيتوكينًا آخر ، IL-17 ، في مواقع استراتيجية محددة في جدار مجرى الهواء. تعمل السيتوكينات المنبعثة على الخلايا الظهارية وخلايا العضلات الملساء وتدفع الاستجابات المرضية لهذه الخلايا التي تساهم في ظهور أعراض المرض. إن بيولوجيا الخلية الكامنة وراء استجابات السلالات المكونة للدم ذات الصلة ليست خاصة بالربو وقد تمت مناقشتها في مكان آخر (Locksley، 2010 Scanlon and McKenzie، 2012). نركز مناقشتنا على مساهمات الخلايا الظهارية وخلايا العضلات الملساء في مجرى الهواء.

بيولوجيا الخلية من ظهارة مجرى الهواء

يتم تغطية مجرى الهواء بورقة متصلة من الخلايا الظهارية (Crystal et al. ، 2008 Ganesan et al. ، 2013).نوعان رئيسيان من خلايا مجرى الهواء ، الخلايا الهدبية والإفرازية ، يؤسسان ويحافظان على الجهاز المخاطي الهدبي ، وهو أمر بالغ الأهمية للحفاظ على سالكية مجرى الهواء والدفاع ضد مسببات الأمراض المستنشقة ومسببات الحساسية. يتكون الجهاز من طبقة هلامية مخاطية وطبقة محورية أساسية. تقوم الخلايا المهدبة بمشروع كل 300 أهداب متحركة في الطبقة المحيطة والتي تعتبر ضرورية لدفع الطبقة المخاطية لأعلى في مجرى الهواء. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الأهداب مغلفة بمخاط يمتد على الأغشية وعديدات السكاريد المخاطية المربوطة التي تستبعد المخاط من الفضاء المحيطي وتعزز تكوين طبقة مخاطية مميزة (Button et al. ، 2012). تنتج الخلايا الإفرازية فئة مختلفة من الميوسينات ، وهي الميوسينات التي تشكل الهلام البوليمري. النوعان الرئيسيان المكونان للهلام في مجرى الهواء هما MUC5AC و MUC5B. تنتج بعض الخلايا الإفرازية ، المعروفة باسم الخلايا المخاطية أو الكأسية ، الميوسينات وتخزنها في مجموعات يسهل تصورها من حبيبات الميوسين ، بينما تنتج الخلايا الأخرى وتفرز الميوسين (خاصة MUC5B) ولكنها تفتقر إلى الحبيبات البارزة. يتم إفراز الميوسينات المكونة للهلام في تجويف مجرى الهواء وهي مسؤولة عن الخصائص اللزجة المرنة المميزة لطبقة الهلام المخاطي.

إصابة مجرى الهواء الظهارية وإعادة تشكيلها في حالة الربو

كثيرًا ما تُلاحظ مجموعة متنوعة من التغييرات الهيكلية في الظهارة وأجزاء أخرى من مجرى الهواء ، تسمى "إعادة تشكيل مجرى الهواء" ، لدى الأفراد المصابين بالربو (إلياس وآخرون ، 1999). وتشمل هذه التغييرات سماكة جدار مجرى الهواء ، والتضخم الظهاري ، والحؤول المخاطي ، والتليف تحت الظهاري ، وتضخم الأرومة الليفية العضلية ، وتضخم الخلايا العضلية الملساء وتضخمها. يُعتقد أن إعادة تشكيل مجرى الهواء يمثل استجابة لإصابة الأنسجة المستمرة التي تسببها العوامل المعدية أو مسببات الحساسية أو الجسيمات المستنشقة واستجابات المضيف لهذه المنبهات. تم تحديد علامات الإصابة الظهارية الصريحة ، بما في ذلك فقدان السلامة الظهارية ، وتعطل الوصلات الضيقة ، وضعف وظيفة الحاجز ، وموت الخلايا ، في بعض الدراسات وقد ترتبط بشدة الربو (Laitinen et al.، 1985 Jeffery et al.، 1989 Barbato et al.، 2006 Holgate، 2007). ومع ذلك ، تظهر أعراض الربو وخصائص إعادة تشكيل مجرى الهواء في العديد من الأفراد ، بما في ذلك الحؤول المخاطي والتليف تحت الظهاري ، في غياب علامات عدوى مجرى الهواء النشطة أو إصابة الأنسجة العلنية (Ordoñez et al. ، 2000) ، مما يشير إلى أن العمليات الأخرى مسؤولة عن استمرار الربو عند هؤلاء الأفراد. تشير الدلائل الجوهرية إلى أن استمرار الربو مدفوع بالاستجابات المناعية المستمرة للمضيف والتي تولد وسطاء يقودون إعادة تشكيل مجرى الهواء واختلال وظائف مجرى الهواء. تُعد الظهارة موقعًا لإنتاج هذه الوسطاء ومصدرًا للخلايا التي تستجيب للوسطاء التي تنتجها الخلايا المناعية والخلايا الأخرى داخل مجرى الهواء. كيف تتعرف الخلايا الظهارية في مجرى الهواء على الفيروسات والمواد المسببة للحساسية والمنبهات الأخرى وتستجيب لها ، تمت مراجعتها بشكل شامل في أماكن أخرى (Lambrecht and Hammad ، 2012). سنركز هنا على مساهمة الظهارة في إنتاج السيتوكينات Th2 والاستجابة لها.

المساهمات الظهارية في مجرى الهواء لاستجابات Th2.

تلعب السيتوكينات Th2 ، وخاصة IL-13 ، دورًا مهمًا في الإصابة بالربو. يتم إنتاج السيتوكينات المتعددة ، بما في ذلك TSLP و GM-CSF و IL-1 و IL-25 و IL-33 ، بواسطة الظهارة وتعزز إنتاج السيتوكينات Th2 بواسطة الخلايا المناعية (Cates et al. ، 2004 Hammad et al. ، 2009 Locksley، 2010 Nagarkar et al.، 2012). تشير دراسات الارتباط على مستوى الجينوم إلى العديد من الجينات المرتبطة بـ Th2 ، بما في ذلك IL13, IL33، و TSLP، في الربو (موفات وآخرون ، 2010 Torgerson et al. ، 2011). يتم إنتاج IL-13 بواسطة الخلايا اللمفاوية الفطرية (Neill et al. ، 2010 Price et al. ، 2010 Saenz et al. ، 2010 Hasnain et al. ، 2011) وخلايا Th2 (Grünig et al. ، 1998 Wills-Karp et al. . ، 1998) أثناء التهاب الحساسية والضامة في نموذج فأر لمرض مجرى الهواء الناجم عن الفيروسات (Kim et al. ، 2008). يؤدي IL-13 إلى تغييرات مميزة في أنماط التعبير عن الخلايا الظهارية للمجرى الهوائي (Kuperman et al. ، 2005b Woodruff et al. ، 2007 Zhen et al. ، 2007) و miRNA (Solberg et al. ، 2012) في الخلايا الظهارية لمجرى الهواء. يمكن استخدام "التوقيع" النسخي لـ IL-13 لتحديد الأفراد المصابين بالربو "Th2 high" و "Th2 low" (Woodruff et al.، 2009). يُفرز بروتين البيريوستين المستحث بـ IL-13 بشكل أساسي من الخلايا الظهارية في مجرى الهواء ويمكن استخدامه كمؤشر حيوي لمرض الربو المرتفع Th2 (Jia et al.، 2012 Parulekar et al.، 2014). ما يقرب من نصف الأفراد المصابين بالربو يعانون من ارتفاع Th2 ، وهؤلاء الأفراد لديهم استجابات أفضل للعلاج بالكورتيكوستيرويدات المستنشقة (Woodruff et al. ، 2009) أو الأجسام المضادة لـ IL-13 (Corren et al. ، 2011). لا تزال الدوافع الرئيسية للربو المنخفض من Th2 غير مفهومة جيدًا ، على الرغم من أن السيتوكينات لعائلة Th17 قد تكون مهمة (Newcomb and Peebles ، 2013).

الحؤول المخاطي.

على الرغم من أن المخاط ضروري للدفاع عن المضيف ، إلا أن إنتاج المخاط المرضي يعد مساهماً هاماً في الإصابة بأمراض الربو والوفيات. في حالة الربو القاتل ، غالبًا ما يتم سد الممرات الهوائية بسدادات مخاطية متينة تعيق حركة الغاز (Kuyper et al. ، 2003). من المحتمل أن تعكس هذه الظاهرة الكارثية زيادة إنتاج الميوسين وإفرازه بالإضافة إلى التغيرات في الترابط المتقاطع للموسين ، وترطيب هلام المخاط ، وإزالة المخاط. لا تقتصر التشوهات في المخاط على نوبات الربو الشديدة لأن زيادة مخازن المخاط داخل الخلايا (الحؤول المخاطي) تُلاحظ حتى في الأفراد المصابين بالربو المستقر ، الخفيف إلى المتوسط ​​(Ordoñez et al. ، 2001). في نماذج مرض الربو التحسسي للفئران ، ينتج الحؤول المخاطي عن زيادة إنتاج وتخزين الميوسينات (خاصة MUC5AC) في الخلايا الإفرازية الموجودة مسبقًا ، بما في ذلك خلايا النادي (إيفانز وآخرون ، 2004) ، بدلاً من التمايز الانتقالي للخلايا الهدبية (باردو-ساغانتا) وآخرون ، 2013). ومع ذلك ، في النماذج التي يحركها الفيروس من الخلايا المخاطية للربو قد تنشأ من تمايز الخلايا الهدبية (Tyner et al. ، 2006). تم عرض مجموعة متنوعة من المحفزات ومسارات الإشارات لتنظيم إنتاج وإفراز الميوسين في الخلايا الظهارية لمجرى الهواء.

يحفز IL-13 إنتاج الميوسين في حالات الربو المرتفع Th2.

التأثيرات المباشرة لـ IL-13 على الخلايا الظهارية في مجرى الهواء تحفز الحؤول المخاطي في الخلايا الظهارية للمجرى الهوائي البشري في المزرعة (Laoukili et al. ، 2001 Zhen et al. ، 2007) وفي الخلايا الظهارية لمجرى الهواء في الفأر في الجسم الحي (Kuperman et al. ، 2002) . IL-13 ضروري للحؤول المخاطي في العديد من نماذج ربو الفئران (Grünig et al. ، 1998 Wills-Karp et al. ، 1998 Tyner et al. ، 2006). الأفراد الذين يعانون من الربو المرتفع Th2 لديهم مستويات مرتفعة من الخلايا الظهارية القصبية MUC5AC مقارنة mRNA مع الضوابط الصحية أو الأفراد الذين يعانون من الربو المنخفض Th2 (Woodruff et al. ، 2009). تُظهر دراسات الفئران المعدلة وراثيًا الحديثة دور MUC5AC في إزالة عدوى الديدان الخيطية المعوية (Hasnain et al. ، 2011) والحماية من عدوى الأنفلونزا (Ehre et al. ، 2012). زيادة MUC5AC لذلك فإن التعبير هو جزء من استجابة مناعية متكاملة تساهم في دفاع العائل ضد مسببات الأمراض أو الجسيمات المستنشقة. من السمات الأقل شهرة للربو المرتفع Th2 الانخفاض الكبير في التعبير عن الربو MUC5B (وودروف وآخرون ، 2009). يشير الاكتشاف الأخير بأن MUC5B مطلوب لإزالة الغشاء المخاطي الطبيعي والدفاع ضد عدوى مجرى الهواء (Roy et al.، 2014) يجب توجيه مزيد من الاهتمام إلى احتمال أن يكون خفض MUC5B مساهماً هامًا في اختلال وظائف مجرى الهواء في الربو.

يتم التعرف على IL-13 بواسطة مستقبلات سطح الخلية المعبر عنها في جميع أنواع الخلايا تقريبًا ، بما في ذلك الخلايا الظهارية لمجرى الهواء (الشكل 2). إن مستقبل IL-13 للخلية الظهارية في المجرى الهوائي الذي يعتبر حاسمًا للحؤول المخاطي هو مغاير مغاير يتكون من IL-13Rα1 و IL-4Rα. أدت إزالة هذا المستقبل من الخلايا الإفرازية الظهارية للمجرى الهوائي (مدفوعة بمحفز CCSP) إلى منع الحؤول المخاطي في نموذج الربو التحسسي (كوبرمان وآخرون ، 2005 أ). يؤدي ارتباط IL-13 إلى تنشيط Jak kinases المرتبط بالمجال السيتوبلازمي للمستقبلات والفسفرة اللاحقة لمحول الإشارة ومنشط النسخ 6 (STAT6). تنشيط STAT6 مطلوب من أجل الحؤول المخاطي الناجم عن IL-13 (كوبرمان وآخرون ، 2002).

سلسلة الأحداث التي تربط تنشيط STAT6 بالحؤول المخاطي مفهومة جزئيًا فقط. لا يبدو أن STAT6 تنظم بشكل مباشر MUC5AC النسخ (Young et al. ، 2007) والأهداف المباشرة الحاسمة لـ STAT6 لم يتم تحديدها. يتضمن أحد المسارات التي تعتمد على تنشيط STAT6 قناة كلوريد البروتين المنشط بالكالسيوم 1 (CLCA1). CLCA1 هي من بين الجينات الأكثر تحفيزًا في الخلايا الظهارية لمجرى الهواء من الأفراد المصابين بالربو (Hoshino et al. ، 2002 Toda et al. ، 2002). على الرغم من اسمها ، لا يبدو أن CLCA1 تعمل كقناة أيونية ولكنها تخضع لإفراز وانقسام خارج الخلية. يمكن أن يحفز CLCA1 خارج الخلية MUC5AC التعبير عن طريق تنشيط MAP kinase MAPK13 (p38δ-MAPK Alevy et al. ، 2012) ، على الرغم من عدم تحديد مستقبل CLCA1 المفترض وأهداف MAPK13 ذات الصلة. يتضمن المسار الثاني مثبط الأنزيم البروتيني Serpin3a ، وهو طبيب تقويم الفئران الخاص بـ SERPINB3 و SERPINB4 البشري. يتم تحفيز هذه السربين بواسطة IL-13 بطريقة تعتمد على STAT6 (Ray et al. ، 2005). بعد تحدي مسببات الحساسية ، Serpin3a - / - كان لدى الفئران حؤول مخاطي أقل من الفئران البرية (Sivaprasad et al. ، 2011) ، على الرغم من الاستجابة الالتهابية السليمة. تشير هذه النتائج إلى أن السربينات تثبط البروتياز الذي يحلل عادة بروتينًا واحدًا أو أكثر مطلوبًا للحؤول المخاطي ، على الرغم من أن البروتياز ذات الصلة وركائزها البروتينية غير معروفة بعد. يتضمن مسار آخر مستحث بـ IL-13 إنزيم 15-ليبوكسجيناز -1 (15-LO-1 Zhao et al. ، 2009). 15-LO-1 يحول حمض الأراكيدونيك إلى حمض 15-هيدروكسييكوساتيترينويك ، والذي ثبت أنه يعزز MUC5AC التعبير في الخلايا الظهارية لمجرى الهواء البشري.

يعتمد حؤول الغشاء المخاطي بوساطة IL-13 و STAT6 على التغيرات في نشاط شبكة عوامل النسخ. يؤدي تنشيط STAT6 بوساطة IL-13 الناجم عن مسببات الحساسية إلى زيادة التعبير عن المجال المشابه لـ SAM المحتوي على عامل مشابه لـ Ets (SPDEF Park et al. ، 2007 Chen et al. ، 2009). يعتمد تحريض SPDEF جزئيًا على الأقل على FOXM1 ، وهو عضو في عائلة عوامل النسخ من عائلة Forkhead box (FOX) (Ren et al. ، 2013). يعد برنامج SPDEF مهمًا أيضًا للحؤول المخاطي الناتج عن محفزات أخرى ، بما في ذلك فيروسات الأنف (Korfhagen et al. ، 2012). على الرغم من أن SPDEF لا يبدو أنه ينظم النسخ الجيني للميوسين بشكل مباشر ، إلا أن SPDEF يبدأ برنامج نسخ ضروري وكافي للحث على الحؤول المخاطي. أحد تأثيرات SPDEF هو تثبيط التعبير عن جين آخر من عائلة FOX ، FOXA2. في الفئران ، حذف Foxa2 في سلائف الخلايا المخاطية كافية للحث على الحؤول المخاطي ، والإفراط في التعبير عن FOXA2 يثبط الحؤول المخاطي الناجم عن مسببات الحساسية (Zhen et al. ، 2007 G. Chen et al. ، 2010). العلاقة بين IL-13 و FOXA2 معقدة. يثبط IL-13 التعبير عن FOXA2 ، مما يساهم في الحؤول المخاطي. ومع ذلك ، حذف Foxa2 في الخلايا الظهارية في مجرى الهواء أثناء نمو الجنين أدى إلى التهاب Th2 وإنتاج IL-13 في مجرى الهواء (G. Chen et al. ، 2010). الأهداف المباشرة المسؤولة عن تأثيرات FOXA2 ليست معروفة بعد.

يؤدي مسار EGFR إلى التعبير الجيني للميوسين والحؤول المخاطي.

يرتبط مستقبل عامل نمو البشرة (EGFR) بروابط متعددة بما في ذلك EGF و TGF-α و EGF المرتبط بالهيبارين و amphiregulin و-cellulin و epiregulin. ينشط ربط Ligand مجال كيناز EGFR ، ويبدأ تسلسلات إشارات مركزية للعديد من العمليات البيولوجية الأساسية ، بما في ذلك تكاثر الخلايا ، والتمايز ، والبقاء ، والهجرة. يجند EGFR للحث على التعبير عن MUC5AC في خطوط الخلايا الظهارية في مجرى الهواء البشري ومثبط التيروزين كيناز الذي يثبط EGFR كيناز يمنع الحؤول المخاطي الناجم إما عن طريق رابط EGFR أو عن طريق تحدي مسببات الحساسية (Takeyama et al. ، 1999). أظهرت الدراسات اللاحقة أن مستويات EGFR الظهارية في الشعب الهوائية تزداد في الربو وترتبط مع شدة المرض (Takeyama et al. ، 2001a) ، وأن إشارات EGFR الظهارية تساهم في الحؤول المخاطي في نموذج الربو المزمن (Le Cras et al. ، 2011).

المنبهات المختلفة ، بما في ذلك المنتجات البكتيرية (Kohri et al. ، 2002 Lemjabbar and Basbaum ، 2002Koff et al. ، 2008) ، والفيروسات (Tyner et al. ، 2006 Zhu et al. ، 2009 Barbier et al. ، 2012) ، ودخان السجائر ( يمكن لـ Takeyama et al.، 2001b Basbaum et al.، 2002) ، ومنتجات الخلايا الالتهابية (Burgel et al. ، 2001) تنشيط مسار EGFR في الخلايا الظهارية لمجرى الهواء. تم إثبات أن بعض المحفزات تبدأ تسلسل إشارات EGFR عن طريق تنشيط الأشكال الإسوية PKC PKC و PKC θ ، مما يؤدي إلى تجنيد الوحدات الفرعية NADPH أوكسيديز p47 phox و p67 phox إلى أوكسيديز ثنائي مرتبط بالغشاء وتوليد أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) على سطح الخلية (Shao and Nadel ، 2005). ينشط ROS بدوره الإنزيم الكامن المحول لـ TGF-α مما يؤدي إلى انشقاق بروابط EGFR السطحية (Shao et al. ، 2003). يؤدي ارتباط يجند EGFR إلى تنشيط مسار Ras-Raf-MEK1 / 2-ERK1 / 2 و MUC5AC الحث النسخي ، والذي يعتمد على عامل النسخ Sp1 ومواقع ربط Sp1 داخل MUC5AC المروج (Takeyama et al. ، 2000 Perrais et al. ، 2002). تقدم مسارات IL-13 و EGFR مساهمات حاسمة ولكنها مميزة لتنظيم الجينات في الخلايا الظهارية لمجرى الهواء (Zhen et al. ، 2007). كلا المسارين يمنعان التعبير عن FOXA2 ، مما يشير إلى أن عامل النسخ هذا قد يمثل مسارًا مشتركًا نهائيًا للحؤول المخاطي الناجم عن IL-13 و EGFR.

تنظم إشارات الشق تمايز الخلايا المخاطية.

تعد إشارات الشق مهمة أيضًا للحؤول المخاطي (Tsao et al. ، 2011). Notch هو مستقبل الغشاء الذي يرتبط بروابط سطح الخلية في العائلات الشبيهة بالدلتا و Jagged. ينشط ارتباط Ligand الانقسام البروتيني بوساطة γ-secretase ويحرر المجال داخل الخلايا Notch ، الذي يدخل النواة ، ويرتبط بعوامل النسخ ، ويدفع التعبير عن جينات Notch المصب. التلاعب الجيني لإشارات الشق في الفئران له تأثيرات مختلفة اعتمادًا على مرحلة النمو. في الرئتين الجنينية المزروعة ، أدت إضافة ليجند Notch أو التعبير عن شكل نشط بشكل أساسي من Notch إلى زيادة الخلايا المخاطية المحتوية على MUC5AC ، في حين أن مثبط γ-secretase قلل من الخلايا المخاطية (Guseh et al. ، 2009). لا يتطلب الحؤول المخاطي الناجم عن الشق تنشيط STAT6 ، مما يشير إلى أن مسارات Notch و STAT6 قد تعمل بالتوازي. في المقابل ، في رئة الفأر بعد الولادة ، تسببت اضطرابات إشارات Notch في الحؤول المخاطي (Tsao et al. ، 2011) ، وهي عملية تعتمد بشكل أساسي على Notch ligand Jagged1 (Zhang et al. ، 2013). يبدو أن الهدف Hes1 من Notch مهم لتثبيط الحؤول المخاطي و MUC5AC النسخ ، على الرغم من تعطيل هس 1 لم تكن كافية للحث على الحؤول المخاطي (Ou-Yang et al. ، 2013). تشير الملاحظة التي تشير إلى أن مثبط γ-secretase قلل من الحؤول المخاطي المستحث بـ IL-13 في الخلايا الظهارية للمجرى الهوائي البشري (Guseh et al. ، 2009) إلى أن هناك ما يبرر مزيدًا من الاهتمام بدور إشارات الشق الظهاري في الربو.

المسار الإفرازي في الخلايا المخاطية

مونومرات Mucin هي بروتينات كبيرة (∼5000 من بقايا الأحماض الأمينية) تتطلب معالجة مكثفة في ER و Golgi. يحتوي كل مونومر موسين على ∼200 من بقايا السيستين التي يمكن أن تشارك في روابط ثنائي كبريتيد داخل الجزيئات وبين الجزيئات. تحتوي ER للخلايا المخاطية على جزيئات متخصصة لا يتم التعبير عنها على نطاق واسع في أنواع الخلايا الأخرى وهي مطلوبة للمعالجة الفعالة للميوسين. واحد من هؤلاء هو متماثل التدرج الأمامي 2 (AGR2) ، وهو عضو في عائلة بروتين ثنائي كبريتيد إيزوميراز. تشكل بقايا السيستين النشطة في الموقع AGR2 روابط ثنائي كبريتيد مختلطة مع mucins في ER والفئران التي تعاني من نقص في AGR2 لها عيوب عميقة في إنتاج الميوسين المعوي (Park et al. ، 2009). في نموذج فأر مصاب بالربو التحسسي ، قللت الفئران التي تعاني من نقص AGR2 من إنتاج المخاط مقارنة بالفئران البرية التي تعاني من الحساسية (Schroeder et al. ، 2012). ارتبط انخفاض إنتاج المخاط بتنشيط استجابة البروتين غير المطوية ، وهي استجابة مميزة لإجهاد ER (Walter and Ron ، 2011). لذلك قد يكون لـ AGR2 دور مباشر في طي الميوسين أو وظيفة أخرى ضرورية للحفاظ على الوظيفة الطبيعية للخلايا المخاطية ER. جزيء آخر موجود في الخلية المخاطية ER هو الإنزيم الذي يحتاج إلى الإينوزيتول 1β (IRE1β) ، وهو مستشعر إجهاد ER عبر الغشاء. يوجد IRE1β في الخلايا المنتجة للمخاط في الأمعاء والمسالك الهوائية ، ولكن ليس في الخلايا الأخرى. ينظم IRE1β نسخ AGR2 ، وقد أدت الفئران التي تعاني من نقص في IRE1β إلى تقليل تعبير AGR2 وإعاقة إنتاج موسين مجرى الهواء في نموذج الربو التحسسي (Martino et al. ، 2013). يبدو أن AGR2 و IRE1β قد تطورتا لتلبية المطالب غير العادية التي تفرضها الحاجة إلى إنتاج كميات كبيرة من الميوسينات.

ORMDL3 ، وهو عضو في عائلة Orm لبروتينات ER عبر الغشاء ، متورط أيضًا في الربو. تعدد الأشكال الجينية في المواقع القريبة من ORMDL3 كانت مرتبطة ارتباطًا وثيقًا بالربو في العديد من دراسات الارتباط على نطاق الجينوم (موفات وآخرون ، 2007 جالانتر وآخرون ، 2008). تسبب تحدي مسببات الحساسية في تعبير ORMDL3 في الخلايا الظهارية في مجرى الهواء بطريقة تعتمد على STAT6 ، على الرغم من ORMDL3 لا يبدو أنه هدف مباشر لـ STAT6 (Miller et al. ، 2012). تشير الدراسات التي تتضمن الإفراط في التعبير أو ضربة قاضية لـ ORDML3 في خلايا HEK293 إلى أن ORMDL3 متورط في تنظيم استجابات الإجهاد ER وإشارات الكالسيوم بوساطة ER (Cantero-Recasens et al. ، 2010). بالإضافة إلى ذلك ، تشكل بروتينات Orm مجمعات تحتوي على سيرين بالميتويل- CoA ترانسفيراز (SPT) ، وهو الإنزيم الأول الذي يحد من معدل إنتاج الدهون السفينجوليبيدية ، وبالتالي قد تساعد في تنسيق استقلاب الدهون في المسار الإفرازي (Breslow et al. ، 2010). أدت التخفيضات الوراثية والدوائية في نشاط SPT إلى فرط استجابة مجرى الهواء في حالة عدم وجود التهاب أو حؤول مخاطي (Worgall et al. ، 2013). هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات لتحديد ما إذا كان دور ORMDL3 في تعديل إنتاج الشحوم السفينغولية ، أو إجهاد ER ، أو إشارات الكالسيوم ، أو وظائف ER الأخرى في الخلايا الظهارية لمجرى الهواء أو الخلايا الأخرى مهمًا في الربو.

ينتقل Mucins من ER إلى Golgi ثم يتم تعبئته في حبيبات كبيرة للإفراز. في Golgi ، الميوسين على نطاق واسع ا-جليكوزيلاتي وخضع لمزيد من التعددية قبل إطلاقه من الخلية عن طريق الإفراز الخلوي المنظم. في جميع أنحاء المسالك الهوائية للفئران العادية وفي الممرات الهوائية البعيدة (الأصغر) للإنسان ، يفسر الإفراز القاعدي معظم إفراز الميوسين ، وتحتفظ الخلايا المنتجة للموسين بقليل جدًا من الميوسين لاكتشافه باستخدام البقع النسيجية. ومع ذلك ، تحتوي الخلايا المخاطية الموجودة في المسالك الهوائية الكبيرة للإنسان والفئران التي تعاني من الحساسية على تراكمات يمكن اكتشافها بسهولة من الحبيبات المحتوية على الميوسين والتي يمكن إطلاقها بواسطة محفزات مختلفة ، بما في ذلك P2ص2 روابط مستقبلات ATP و UTP والبروتياز التي تشق المستقبلات التي تنشط بالبروتياز. الفئران التي تفتقر إلى البروتين الأولي الخارجي Munc13-2 تتراكم الميوسين في الخلايا الإفرازية التي عادةً ما تحتوي على حد أدنى من الميوسين داخل الخلايا (خلايا النادي) ولكن يمكنها إفراز الميوسين استجابةً للتحفيز (Zhu et al. ، 2008). على النقيض من ذلك ، فإن الفئران التي تعاني من مسببات الحساسية التي تفتقر إلى مستشعر الكالسيوم منخفض التقارب synaptotagmin-2 لديها عيب شديد في إفراز الميوسين في مجرى الهواء الذي يحفزه ناهض حاد ، ولكنها تحافظ على الإفراز القاعدي ولا تتراكم الميوسينات في خلايا النادي (توفيم وآخرون ، 2009) . يعتمد الإفراز المحفز بالناهض أيضًا على قناة الكلوريد المنشط بالكالسيوم IL-13 المحفزة TMEM16A ، والتي تزداد في الخلايا المخاطية من الأفراد المصابين بالربو (Huang et al. ، 2012). نظرًا لأن زيادة إنتاج MUC5AC عبر الإفراط في التعبير الجيني لم يكن في حد ذاته كافيًا للتسبب في انسداد مجرى الهواء (Ehre et al. ، 2012) ، فمن المحتمل أن العيوب النوعية في معالجة المخاط أو إفرازه أو ترطيبه والتي تؤثر على الخصائص الفيزيائية والكيميائية للمخاط تساهم في مجرى الهواء. انسداد في الربو. يعتبر النقل الظهاري للماء والأيونات ، بما في ذلك H + وبيكربونات ، مهمًا في الحفاظ على الخصائص الطبيعية للمخاط (E. Chen et al. ، 2010 Paisley et al. ، 2010 Garland et al. ، 2013). قد يؤدي الإفراز السريع للميوسين المخزن ، غير المرطب بالكامل ، إلى تكوين مخاط مطاطي مركّز لا يمكن إزالته بشكل طبيعي عن طريق الأهداب أو السعال (فاهي وديكي ، 2010). ومن ثم ، فإن IL-13 (Danahay et al. ، 2002 Nakagami et al. ، 2008) وغيره من وسطاء الربو الذين يؤثرون على مياه الخلايا الظهارية في مجرى الهواء ونقل الأيونات يمكن أن يساهموا في انسداد مجرى الهواء عن طريق تغيير الخصائص الفيزيائية والكيميائية للمخاط.

هيكل الخلية الهدبية ووظيفتها في الربو

بالمقارنة مع أدبيات الربو الواسعة المتعلقة بالخلايا المخاطية ، ركزت تقارير قليلة نسبيًا على الخلايا الهدبية. وجدت إحدى الدراسات التي أجريت على شرائح الخلايا الظهارية التي تم الحصول عليها عن طريق تنظيف الأسنان بالفرشاة انخفاض وتيرة النبض الهدبي وزيادة في أنماط الضرب الهدبية غير الطبيعية وعيوب البنية التحتية الهدبية لدى الأفراد المصابين بالربو مقارنة بالضوابط الصحية (Thomas et al. ، 2010). كانت هذه التشوهات أكثر وضوحا في حالات الربو الحاد. كانت التشوهات الهدبية مصحوبة بزيادة في عدد الخلايا الميتة ودليل على فقدان السلامة الهيكلية الظهارية ، مما يشير إلى أن الخلل الوظيفي الهدبي قد يكون نتيجة لإصابة ظهارية عامة. على أي حال ، تشير هذه النتائج إلى أن الخلل الوظيفي الهدبي قد يكون مساهماً مهماً في اختلال إزالة الغشاء المخاطي الهدبي في الربو.

البيولوجيا الخلوية للعضلات الملساء في مجرى الهواء في الربو

تضييق مجرى الهواء المفرط الذي يمكن أن يؤدي إلى ضيق شديد في التنفس وفشل في الجهاز التنفسي والوفاة من الربو يرجع إلى حد كبير إلى تقلص عصابات العضلات الملساء الموجودة في جدران الممرات الهوائية الكبيرة والمتوسطة الحجم في الرئة. في الممرات الهوائية المركزية الكبيرة للإنسان ، توجد هذه العصابات العضلية في الجزء الخلفي من الشعب الهوائية وترتبط بحلقات غضروف مجرى الهواء الأمامية ، ولكن في المزيد من الممرات الهوائية المحيطية ، توجد العضلات الملساء محيطيًا حول الممرات الهوائية. في كلا الموقعين ، يؤدي تقلص العضلات الملساء ، والذي يمكن أن يحدث من الناحية الفسيولوجية عن طريق إطلاق الأسيتيل كولين من الأعصاب السمبتاوي الصادرة أو عن طريق إطلاق الهيستامين وسيستينيل الليكوترينات من الخلايا البدينة والخلايا القاعدية ، إلى تضييق مجرى الهواء ، مع تضييق أكبر في المسالك الهوائية متوسطة الحجم . في الثدييات السليمة ، بما في ذلك البشر ، تؤدي الاستجابات الفسيولوجية لإفراز الأسيتيل كولين من الأعصاب الصادرة أو إطلاق الهيستامين والليوكوترين من الخلايا البدينة والخلايا القاعدية إلى ضيق مجرى الهواء الخفيف وغير المصحوب بأعراض بشكل عام. كما أن الثدييات العادية مقاومة بشكل عام لتضييق مجرى الهواء الملحوظ استجابةً للإعطاء الدوائي لتركيزات عالية من ناهضات الانقباض مباشرة في الشعب الهوائية. ومع ذلك ، يعاني الأشخاص المصابون بالربو من زيادة ملحوظة في الحساسية تجاه كل هذه المنبهات التي يمكن إثباتها بسهولة من خلال الزيادات الهائلة في مقاومة مجرى الهواء والانخفاضات المصاحبة في معدلات تدفق الهواء الزفير القصوى أثناء مناورات الزفير القسرية (Boushey et al. ، 1980). توضح المقارنات الحديثة بين الاستجابات لمسببات الحساسية المستنشقة في الأشخاص المصابين بالربو التحسسي وموضوعات أخرى ذات استجابات مناعية جلدية شديدة مماثلة لمسببات الحساسية أن جميع البشر المصابين بالحساسية يطلقون كميات مماثلة إلى حد كبير من مضيقات الشعب الهوائية في الممرات الهوائية (أي الهيستامين والليوكوترينات) ، ولكن المصابين بالربو فقط هم من يتطورون تضيق مجرى الهواء بشكل مبالغ فيه استجابة لهؤلاء الوسطاء (بيكي كيلي وآخرون ، 2003).

آليات تنظيم توليد القوة عن طريق اقتران العضلة الملساء الأكتين والميوسين في مجرى الهواء

يتم التوسط في توليد القوة عن طريق العضلات الملساء في مجرى الهواء من خلال التفاعلات بين الأكتين والميوسين التي تعتمد على فسفرة السلسلة الخفيفة للميوسين بواسطة سيرين ثريونين كيناز ، كيناز سلسلة خفيفة من الميوسين (الشكل 3). يتم تنظيم هذه العملية بشكل سلبي بواسطة فوسفاتيز الميوسين. تؤدي الزيادات في تركيز الكالسيوم داخل الخلايا في خلايا العضلات الملساء إلى التقلص من خلال مسارين متوازيين. عندما يرتبط بالكالسيوم ، فإن سيرين ثريونين كيناز كالودولين فسفوريلات مباشرة ، وبالتالي ينشط كيناز سلسلة خفيفة من الميوسين. تؤدي زيادة الكالسيوم أيضًا إلى زيادة تحميل GTP من GTPase ، RhoA ، مما يزيد من نشاط كينازات البروتين المستجيب لـ Rho المرتبطة باللفائف المحتوية على الملفوف 1 و 2 (ROCK 1 و 2). ROCKs فسفوريلات الفوسفاتاز سلسلة خفيفة الميوسين مباشرة ، وهو تأثير يعطل الفوسفاتيز ، مما يعزز فسفرة الميوسين. يمكن أيضًا تنشيط RhoA بشكل مستقل عن الزيادات في الكالسيوم داخل الخلايا.

هناك العديد من المسارات الأولية لزيادة [Ca] في العضلات الملساء في مجرى الهواء. يتم إطلاق الأسيتيل كولين من الأعصاب الصادرة بعد العقدة الباراسمبثاوية التي تعصب العضلات ، وتنشط مستقبلات M2 المسكارينية المقترنة ببروتين G ، والتي تقترن بـ Gαq. Gαq المحمّل بـ GTP ينشط مستجيب المصب ، PLCβ ، الذي فسفرته PIP2 لتوليد IP3. IP3 ، بدوره ، يرتبط بمستقبلات IP3 على الشبكة الساركوبلازمية لتحفيز انتقال الكالسيوم إلى العصارة الخلوية. ترتبط ناهضات الانقباض الأخرى ، بما في ذلك الهيستامين والبراديكينين والسيروتونين (5-HT ، تختلف ناهضات ومستقبلات محددة باختلاف أنواع الثدييات) بمستقبلات مقترنة ببروتين G مختلفة لتحريك المسار نفسه. عادةً ما يرتبط تقلص العضلات الملساء في المجرى الهوائي الناجم عن ناهضات التذبذبات الدورية في [Ca] ، ويُعتقد أنه ناتج عن التغيرات المحلية في الكالسيوم العصاري الخلوي مما يؤدي إلى إعادة امتصاص الكالسيوم بواسطة الشبكة الساركوبلازمية ، ويرتبط حجم القوة الانقباضية المستحثة بشكل وثيق مع تردد تذبذبات الكالسيوم هذه بدلاً من اتساعها (Bergner and Sanderson، 2002).

يمكن أيضًا أن تحدث الزيادات في تركيز الكالسيوم في العصارة الخلوية عن طريق تدفق الكالسيوم من الفضاء خارج الخلية ، ويرجع ذلك عمومًا إلى فتح قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي في غشاء البلازما. يمكن فتح هذه القنوات تجريبيًا عن طريق زيادة التركيز خارج الخلية لأيونات البوتاسيوم ، مما يؤدي أيضًا إلى تقلص العضلات الملساء في مجرى الهواء. تزيد تركيزات البوتاسيوم المتزايدة خارج الخلية أيضًا من إطلاق الأسيتيل كولين من الأعصاب الصادرة بعد العقدة ، لذا فإن التفسير الصحيح لتأثيرات KCl يتطلب إضافة متزامنة لمضاد مسكاريني مثل الأتروبين.

تنظيم توليد القوة العضلية الملساء في مجرى الهواء من خلال مجمعات الالتصاق المحتوية على الإنتجرين

من أجل ترجمة تقلص خلايا العضلات الملساء إلى القوة المطلوبة لتضييق مجرى الهواء ، يجب ربط خلية العضلات الملساء المتقلصة بقوة بـ ECM الأساسي. يتم تحقيق الارتباط بـ ECM من خلال تنظيم مجمعات متعددة البروتينات من خلال الأنوية بواسطة إنتغرينات. يمكن للمجالات السيتوبلازمية القصيرة للإنتغرينات تنظيم آلات كبيرة متعددة البروتينات بشكل مدهش تقوم بتعديل مسارات إشارات متعددة وتربط الإنتغرينات (وبالتالي روابط ECM الخاصة بها) بالهيكل الخلوي أكتين-ميوسين (Yamada and Geiger ، 1997 Zaidel-Bar et al. ، 2007) . تعمل العديد من ناهضات الانقباض التي تحفز فسفرة الميوسين والتفاعل بين الأكتين والميوسين في نفس الوقت على تعزيز تكوين مجمعات إشارات الإنتغرين ، وتحفيز بلمرة الأكتين في مواقع الالتصاق ، وتقوية الاقتران بين الهيكل الخلوي أكتين - الميوسين و ECM (Mehta and Gunst ، 1999 Tang et al.، 1999، 2003 Gunst and Fredberg، 2003 Gunst et al.، 2003 Opazo Saez et al.، 2004). يبدو أن هذه الأحداث مهمة أيضًا لتوليد أقصى قوة مقلصة لأن التدخلات التي تمنع تكوين أو نشاط معقدات الالتصاق يمكن أن تمنع قوة الانكماش دون التأثير على فسفرة الميوسين (Mehta and Gunst ، 1999 Tang et al. ، 2003 Opazo Saez et آل ، 2004).

الدروس المستفادة من السلوك غير الطبيعي للعضلات الملساء في مجرى الهواء في النماذج الحيوانية

الفئران التي تفتقر إلى α9β1 α91 في العضلات الملساء في مجرى الهواء.

على الرغم من وجود اختلافات كبيرة بين تنظيم المسالك الهوائية في الفئران والبشر ، فإن التشوهات في الجسم الحي في تضيق مجرى الهواء التي شوهدت في نماذج الفئران توفر بعض النظرة الثاقبة للمسارات التي يحتمل أن تسهم في تقلص العضلات الملساء غير الطبيعي في مجرى الهواء في الربو. لأغراض هذا الاستعراض ، سوف نستشهد بثلاثة أمثلة توضيحية. يتم التعبير عن الإنتجرين α9β1 بدرجة عالية في العضلات الملساء لمجرى الهواء (Palmer et al. ، 1993). تؤدي الضربة القاضية المشروطة للوحدة الفرعية للإنتيجرين α9 (الموجودة بشكل فريد في α9β1 إنتجرين) إلى زيادة تلقائية في استجابة مجرى الهواء في الجسم الحي (كما تم قياسها من خلال الزيادات في المقاومة الرئوية استجابة لأسيتيل كولين في الوريد) ، وزيادة الاستجابات الانقباضية لمنبهات الكوليني لكليهما دراسة المسالك الهوائية في شرائح الرئة وحلقات القصبة الهوائية في حمام الأعضاء (Chen et al. ، 2012). ومن المثير للاهتمام ، أنه على الرغم من أن حلقات القصبة الهوائية من هذه الفئران قد زادت أيضًا من استجاباتها الانقباضية لمنبهات مستقبلات مقترنة ببروتين G (مثل السيروتونين) ، فإن لديهم استجابات مقلصة طبيعية لإزالة الاستقطاب باستخدام KCl. تشير هذه النتائج إلى أن فقدان α9β1 يزيد من استجابة مجرى الهواء في مرحلة ما قبل إطلاق الكالسيوم من الشبكة الساركوبلازمية (الشكل 4 أ). في هذه الحالة ، يبدو أن زيادة استجابة مجرى الهواء ناتجة عن فقدان التوطين المشترك لإنزيم سبيرميدين / سبيرمين N1-acetyltransferase (SSAT) ، والذي يرتبط مباشرة بمجال α9 السيتوبلازمي (Chen et al. ، 2004) ، و lipid kinase ، PIP5K1γ ، الذي يرتبط مباشرة بـ talin ، شريك رابط للوحدة الفرعية للإنترين -1. يعتبر spermidine و spermidine من العوامل المساعدة الحاسمة لـ PIP5K1γ ، لذا فإن تجاورها مع SSAT يقلل بشكل فعال من النشاط الأنزيمي. يحول PIP5K1γ PI4P إلى PIP2 وهو مسؤول عن معظم PIP2 المنتج في خلايا العضلات الملساء في مجرى الهواء (Chen et al. ، 1998). PIP2 هي الركيزة لتوليد IP3 بواسطة PLCβ ، لذلك عندما يكون α9β1 موجودًا ومربوطًا ، فإن منبهات الانقباض التي تنشط المستقبلات المقترنة بـ Gαq تحفز توليد IP3 أقل (Chen et al. ، 2012) وبالتالي إطلاق Ca 2+ أقل من خلال مستقبلات IP3 في شبكية الهيولى العضلية. تم تأكيد أهمية هذا المسار من خلال الملاحظات التي تشير إلى أن تواتر تذبذبات الكالسيوم 2+ الناجم عن ناهضات الكوليني قد انخفض في شرائح الرئة من الفئران التي تفتقر إلى α9β1 ، وأنه يمكن إنقاذ جميع التشوهات في العضلات الملساء من هذه الحيوانات عن طريق إضافة شكل نفاذية للخلايا من PIP2 (Chen et al. ، 2012).

آثار السيتوكينات في الخلايا التائية على انقباض العضلات الملساء في مجرى الهواء.

أشارت العديد من الدراسات التي أجريت على مدار الخمسة عشر عامًا الماضية إلى أن السيتوكينات المنبعثة من الخلايا التائية يمكن أن تساهم في فرط استجابة مجرى الهواء في الربو التحسسي (Locksley ، 2010). تمت دراسة Th2 cytokine IL-13 على نطاق واسع ، ويمكنه إحداث حؤول مخاطي وفرط استجابة مجرى الهواء عند إعطائه مباشرة في المسالك الهوائية للفئران (Grünig et al. ، 1998 Wills-Karp et al. ، 1998). في المختبر ، يزيد حضانة حلقات القصبة الهوائية أو شرائح الرئة من تضييق المسالك الهوائية في شرائح الرئة ويزيد من توليد القوة بواسطة حلقات القصبة الهوائية للفأر ، على الأقل جزئيًا عن طريق إحداث زيادة كبيرة في التعبير عن GTPase الصغير ، RhoA (Chiba et al. ، 2009 ) ، وهو عامل حاسم لتقلص العضلات الملساء في مجرى الهواء (الشكل 4 ب). كما أدى تحدي مسببات الحساسية المزمن أو الإدارة المباشرة لـ IL-13 في المسالك الهوائية للفئران إلى زيادة تعبير RhoA ، بالإضافة إلى تحريض فرط استجابة مجرى الهواء. اقترحت دراسة حديثة أن IL-17 يمكن أن يزيد أيضًا من انقباض العضلات الملساء في مجرى الهواء وتضييق مجرى الهواء عن طريق تحريض RhoA في خلايا العضلات الملساء في مجرى الهواء (Kudo et al. ، 2012). في تلك الدراسة ، تمت حماية الفئران التي تفتقر إلى αvβ8 إنتجرين على وجه التحديد على الخلايا المتغصنة التي تقدم المستضد من فرط استجابة مجرى الهواء الناجم عن مسببات الحساسية. كان لدى هذه الفئران نفس الدرجة من التهاب مجرى الهواء العام والحؤول المخاطي استجابةً لمسببات الحساسية مثل الفئران الضابطة من النوع البري ، ولكن كان لديها عيب محدد جدًا في توليد خلايا Th17 الخاصة بالمستضد ، وهو مصدر مهم لـ IL-17 في الرئتين ( كودو وآخرون ، 2012). في المختبر ، تبين أن IL-17 يزيد بشكل مباشر من انقباض حلقات القصبة الهوائية للفأر ويزيد من مستويات بروتين RhoA ومؤثره النهائي ، ROCK2 ، ولزيادة الفسفرة لهدف ROCK المباشر ، فوسفاتيز الميوسين. يثبط الفسفرة في فوسفاتيز الميوسين وظيفته ، وقد تبين أيضًا أن IL-17 يزيد بالتالي من فسفرة كيناز سلسلة خفيفة من الميوسين. الأهم من ذلك ، تم إحداث كل هذه التأثيرات الكيميائية الحيوية بشكل كبير في الجسم الحي في العضلات الملساء في مجرى الهواء لفئران التحكم استجابةً لتحسس مسببات الحساسية والتحدي ، ولكن تم تقليلها جميعًا بشكل ملحوظ في الفئران التي تفتقر إلى αvβ8 على الخلايا المتغصنة. علاوة على ذلك ، فإن حلقات القصبة الهوائية التي تمت إزالتها من هذه الفئران بالضربة القاضية بعد تحدي المواد المسببة للحساسية قد انخفضت في انقباض المختبر مقارنةً بحلقات من الفئران المتحكمة بمسببات الحساسية ، ولكن تم القضاء على هذا الاختلاف في الانقباض عن طريق الإضافة الخارجية لـ IL-17. تشير هذه النتائج بقوة إلى أن كلا من IL-13 و IL-17 يمكن أن يسهما في فرط استجابة مجرى الهواء عن طريق الحث المباشر على تعبير RhoA في العضلات الملساء في مجرى الهواء (الشكل 4 ب). تم إثبات أن عامل نخر الورم α ، المتورط أيضًا في التسبب في الربو ، يزيد من انقباض العضلات الملساء في مجرى الهواء بآلية مماثلة (Goto et al. ، 2009).

تقلص العضلات الملساء بوساطة السيتوكين في الفئران التي تعاني من نقص MFGE8.

عامل EGF 8 (MFGE8) هو بروتين مُفرَز يتكون من مكرري EGF ومجالني ديسكويدين. تم وصف MFGE8 في الأصل لتسهيل امتصاص الخلايا المبرمجة بواسطة الخلايا البلعمية (Hanayama et al. ، 2004). الفئران التي تفتقر إلى MFGE8 لها شكل أساسي طبيعي لتشكل الرئة ووظائفها ، ولكنها بالغت في استجابة مجرى الهواء بعد التحسس والتحدي لمسببات الحساسية (Kudo et al. ، 2013). ومع ذلك ، لا يبدو أن هذا الشذوذ مرتبط بأي تأثيرات على امتصاص الخلايا المبرمج. أظهر المناعة أن إفراز MFGE8 كان يتركز بجوار العضلات الملساء في مجرى الهواء. حلقات القصبة الهوائية التي تمت إزالتها من الفئران التي خرجت من MFGE8 كانت لها استجابات مقلصة طبيعية عند خط الأساس ، لكنها عززت بشكل ملحوظ الاستجابات الانقباضية بعد الحضانة طوال الليل باستخدام IL-13 ، ويمكن إنقاذ هذه الزيادة في الانقباض عن طريق إضافة MFGE8 المؤتلف إلى حمام العضلات. الأهم من ذلك ، تطلب الإنقاذ وجود واحد على الأقل من مجالات الديسكويدين وعزر RGD المرتبط بالإنتجرين لتكرار EGF الثاني. في حلقات القصبة الهوائية والعضلات الملساء في مجرى الهواء المزروعة ، أدى فقدان MFGE8 إلى تحسين زيادة البروتين المستحث بـ IL-13 في RhoA. تشير هذه النتائج إلى أن ربط واحد أو أكثر من الإنتجرينات المرتبطة بـ RGD على العضلة الملساء في مجرى الهواء بواسطة MFGE8 خارج الخلية يعمل عادةً ككابح على تحريض RhoA بوساطة السيتوكين ، وبالتالي يحد من فرط استجابة مجرى الهواء الناجم عن السيتوكين (الشكل 4 ب). إن الإنتجرين (الإنتجرين) المحدد المتضمن في هذه الاستجابة ، والآليات الجزيئية التي تربط ربط الإنتجرين بتثبيط RhoA ، والدور والشريك (الشركاء) الملزمين لمجالات MFGE8 discoidin المطلوبة لتثبيط RhoA لا يزال يتعين تحديدها.

الاستنتاجات

تم إحراز تقدم سريع نحو تحديد جزيئات الخلايا العضلية الملساء والظهارية والمسارات التي يمكن أن تنتج العديد من التشوهات الموجودة في الأفراد المصابين بالربو. نظرًا لأن هذه الاكتشافات تم إجراؤها في أنظمة تجريبية متنوعة ، ما زلنا نواجه تحديات كبيرة في فهم كيفية تفاعل هذه الجزيئات والمسارات في الجسم الحي وفي تحديد المسارات الأكثر صلة بالأشخاص المصابين بالربو. الربو هو مرض غير متجانس ، والتقدم الأخير نحو تحديد الأنواع الفرعية ذات الآليات الفيزيولوجية المرضية المتميزة يعد بتركيز الانتباه على مسارات معينة في خلايا العضلات الظهارية والملساء (Lötvall et al. ، 2011). سيكون من المهم بشكل خاص فهم الآليات الكامنة وراء الربو الحاد. يعاني ما يقرب من 5-10٪ من المصابين بالربو من مرض شديد ، مع استمرار الأعراض على الرغم من العلاج القياسي بموسعات الشعب الهوائية والكورتيكوستيرويدات المستنشقة (برايتلينج وآخرون ، 2012). هؤلاء الأفراد لديهم معدلات عالية من تفاقم الربو مما يؤدي إلى دخول المستشفى وهم معرضون لخطر مرتفع نسبيًا للإصابة بنوبات الربو القاتلة. سيكون الاهتمام المستمر بدراسة بيولوجيا الخلية للربو أمرًا حاسمًا لتوليد أفكار جديدة للوقاية من الربو وعلاجه بناءً على تطبيع وظيفة العضلات الظهارية والملساء.


نتائج ومناقشة

نظرًا لأن معرفتنا بحساسية الفول السوداني اقتصرت على أنواع المحاصيل وأسلافها الجينوميين ، وبالنظر إلى النتائج التي تشير إلى أن بدائل الأحماض الأمينية الفردية يمكن أن يكون لها تأثير كبير على الحساسية [14 ، 31 ، 32] ، فمن المناسب استكشاف حمض أميني واحد بدائل في الأنواع البرية أراشيس وتقييم تأثيرها على الحساسية. للقيام بذلك ، قمنا بتسلسل اثنين من مسببات الحساسية المناعية آرا ح 2 و آرا هـ 6 من 24 نوعًا تمثل السلالات الرئيسية في أراشيس واستخدمت طرقًا متعددة لوصف التغيرات الجزيئية وتحديد تأثيرها على الحساسية. ظهرت ثلاث نتائج مذهلة من هذه الدراسة. واحد ، متماثلان مثيران للحساسية تمت دراستهما ، آرا ح 2 و آرا ح 6، اتبعت مسارات تطورية متناقضة للغاية. خاصة، آرا ح 2 خضع لنسبة أعلى من بدائل الأحماض الأمينية مقارنة بـ آرا ح 6 وقد تراكمت إلى حد بعيد عددًا أكبر من الخسائر والمكاسب في الأشكال التي تتراوح من 1-24 من الأحماض الأمينية (S1 الشكل). اثنان ، والأهم من ذلك ، تركزت هذه التعديلات الجزيئية في الغالب في المناطق الغنية بالحلقات المناعية ، وتحديداً في الحلقات 6 و 7 (الشكل 2 ، S1 الشكل). ثالثًا ، الأحداث الطفرية (الاستبدالات والإدخال / الحذف) خاصة في آرا ح 2 يبدو أنها تتبع اتجاهات النشوء والتطور من قاعدة أراشيس شجرة إلى الفروع الطرفية.تثير هذه النتائج أسئلة حول العوامل الأساسية التي تأثرت بشكل مختلف آرا ح 2 و آرا ح 6 أنماط التطور وما إذا كانت هذه التغييرات الجزيئية مرتبطة بإبراز محتمل للحساسية. لمعالجة هذا الوضع البيولوجي الغريب ، سنقارن بين المتماثلين في طبقات جزيئية مختلفة ونناقش النتائج في إطار نسج / تطوري.

تم تصنيف الثغرات والحلقات. تشير الأرقام الموجودة أعلى الأعمدة إلى مواضع المحاذاة.

التركيب الجزيئي المقارن عبر الجنس أراشيس

أحد النتائج البارزة في هذه الدراسة هو أن آرا ح 2 و آرا ح 6 متماثلون من البرية أراشيس الأنواع تختلف اختلافًا كبيرًا في أنماط الطفرات وطول ORF. لإلقاء الضوء على العوامل الأساسية التي قد تفسر هذه الاختلافات وتقييم تأثير هذا النمط المتباين للتطور على هذه البروتينات ، قمنا بتقييم التركيبات الجزيئية على مستويين: مستويات النيوكليوتيد والأحماض الأمينية. تراكيب النوكليوتيدات لكامل ORFs آرا ح 2 و آرا ح 6 يتم عرض المتماثلات وكذلك ترددات النيوكليوتيدات لكل موضع كودون في الشكل 3. بشكل عام ، لم يختلف المتماثلان بشكل كبير في تكوين النيوكليوتيدات عبر الجنس منذ أن رفض اختبار t فرضية العدم. هذا يسلط الضوء على القيود الملحوظة على طريقة بدائل النوكليوتيدات للحفاظ على التراكيب المماثلة.

متوسط ​​النسب المئوية لنسب Adenine (A) و Thymine (T) و Guanine (G) و Cytosine و GC. تم إجراء الحسابات لتسلسل الحمض النووي الكلي ومواقع الكودون الفردية لـ آرا ح 2 و آرا ح 6 من أنواع Arachis. تدل الرموز 1 و 2 و 3 على مواضع كودون 1 و 2 و 3. يتم تقديم البيانات على أنها تعني ± SD. تم تطبيق ANOVA ثنائي الاتجاه مع اختبار Sidak اللاحق. لم يكن المتماثلان مختلفين إحصائيًا في تكوين النيوكليوتيدات.

لقد تم إثبات أن محتوى GC العالي يرتبط ارتباطًا إيجابيًا بمعدلات الاستبدالات [62 ، 63]. دراسة حديثة تركز على أ. دورانينسيس قدر متوسط ​​محتوى GC بنسبة 31.8٪ للجينوم بأكمله ، وهو ما يتماشى مع معظم البقوليات التي تم فحصها [9]. كانت نسبة GC الإجمالية لكلا المتماثلين متشابهة إلى حد كبير (آرا ح 2 = 55.7± 0.8 آرا ح 6 = 56.1 ± 0.5 (الشكل 3). متوسط ​​محتوى 56٪ GC من آرا ح 2 و آرا ح 6، وهي أعلى بكثير (75٪) من تلك المبلغ عنها في المجموع أ. دورانينسيس يشير الجينوم إلى مشهد جيني مناسب لتسريع معدلات الطفرات في كليهما. ومع ذلك ، ظل تواتر بدائل الأحماض الأمينية أقل في آرا ح 6. أحد الاختلافات الملحوظة هو ذلك آرا ح 2 عرضت نسب GC أعلى نسبيًا في مواضع الكودون الأول والثاني مقارنةً بـ آرا ح 6 (تين. 3). قد يفسر هذا الاختلاف جزئيًا بدائل الأحماض الأمينية المرتفعة في آرا ح 2 نظرًا لأن الطفرات في مواضع الكودون الأول والثاني تُترجم إلى 96٪ و 100٪ بدائل غير مترادفة ، على التوالي ، مقارنة بـ 31٪ للوضع الثالث [64].

يظهر المتماثلان ، على الرغم من كونهما شديد الحساسية ، تباينًا في عدد وأنماط بدائل الأحماض الأمينية (الشكل 4 ، S1 الشكل). هويات تسلسل الأحماض الأمينية المتبادلة لـ آرا ح 2 عبر ال أراشيس تراوحت بين 65.5٪ إلى 99.4٪ (متوسط ​​89.4٪ ± 8.2) مقابل 75.7٪ -99.3٪ آرا هـ 6 (متوسط ​​93.2٪ ± 5.3) ، مما يؤكد ارتفاع وتيرة الاستبدالات في السابق. في حالة آرا ح 2، يتراوح طول ORF من 156 إلى 181 من الأحماض الأمينية (جدول S1). محاذاة الأحماض الأمينية آرا ح 2 تطلب إدخال 17 فجوة تتراوح من 1 إلى 29 من الأحماض الأمينية ، مما أدى إلى 203 مواضع محاذاة (S1 الشكل). الأهم من ذلك ، تعرض مواضع الأحماض الأمينية 59-90 في الحاتمة 5 والحلقات المناعية 6 و 7 و 7 ب المعترف بها حديثًا بدائل البقايا والخسائر / المكاسب التي قد تؤثر على الحساسية (الشكل 2). تم تحديد ثلاثة عشر فجوة في القطاع الذي يشتمل على الحلقات 6 و 7 و 7 ب ووصفها A-L (الشكل 2). تقدم الطفرة في الموضع 64 علامة جزيئية للأصل الجيني للمحصول رباعي الصبغيات لأنه جليكاين (G) في جميع الملحقات الثلاثة أ. إيبينسيس وحمض الجلوتاميك (E) في الكل أ. hypogaea و أ. دورانينسيس ملحقات (الشكل 2).

تم تطبيق ANOVA ثنائي الاتجاه مع اختبار Sidak اللاحق. يتم تقديم جميع البيانات على أنها متوسط ​​± SD. * p & lt 0.05 ، ** p & lt 0.01 ، *** p & lt 0.001 ، **** p & lt0.0001.

ال آرا ح 6 في المقابل ، أظهر ORF نطاقًا أضيق من بقايا الأحماض الأمينية عبر الجنس ، من 145 إلى 147 (جدول S1). كانت هناك حاجة إلى ثغرات تسلسلية فقط للمحاذاة ، تقابل الميثيونين في الموضع 22 والأرجينين في الموضع 69 (S1 الشكل). ومن المثير للاهتمام ، أن كود البدء الظاهر داخل الإطار في الموضع 22 قد تطور في الأنواع التي ظهرت بعد التباعد المبكر. أ. تريسميناتا, أ. باراغوارينيس و أ. macedoi. لا يمكن اعتبار بقايا الميثيونين هذه بمثابة كودون بدء بديل لأنه يحدث في اتجاه مجرى منطقة ببتيد الإشارة. كانت الاختلافات المتبقية في الأحماض الأمينية ناتجة عن البدائل ، مما يؤكد الأنماط المتناقضة للتطور التي مر بها آرا ح 2 و آرا ح 6 عبر الجنس. الخسارة / الكسب غير المتكرر لبقايا الأحماض الأمينية في آرا ح 6 عبر الجنس أراشيس مقارنة مع آرا ح 2 أمر مثير للاهتمام ويمكن أن يعزى إلى القيود الهيكلية / الوظيفية على هذا البروتين المسبب للحساسية.

لتقييم عدم التجانس المحتمل في تكوين الأحماض الأمينية عبر أراشيس التاريخ التطوري للجنس بسبب الأحداث الطفرية الملحوظة ، قمنا بتحليل تركيبات الأحماض الأمينية لـ آرا ح 2 و آرا ح 6 متماثلون. كان الاثنان متشابهين في تكوين الأحماض الأمينية عبر الجنس ، وكانا منخفضين في التربتوفان (W) ومرتفعين في أرجينين (R) والجلوتامين (Q) (الشكل 4 وجدول S2). تتوافق هذه النتائج مع الدراسات السابقة حول الفول السوداني [65]. كان التريبتوفان ينقصه آرا ح 2 من ثلاثة أنواع و آرا ح 6 14 نوعًا (جدول S2). لوحظ أن آرا ح 2 استيعاب تباين أعلى عبر الجنس أراشيس في الجلوتامين (Q) ، البرولين (P) ، والأسبارتات (D) ، في حين آرا ح 6 أظهر تباينًا أعلى في الجلوتامات (E) والهيستيدين (H) والأرجينين (R) (S2 Fig و S2 Table). على الرغم من أنماط التباين المتناقضة ، فإن المتجانسين متشابهان في التركيب من حيث المجموعات الكيميائية الفيزيائية للأحماض الأمينية الخمسة وهما غنيان بالأحماض الأمينية الكارهة للماء ومنخفضين في الأحماض الأمينية العطرية (الشكل 5). لذلك ، يبدو أن الأحداث الطفرية في المتماثلين مقيدة للحفاظ على تكوين المجموعات الفيزيائية والكيميائية من أجل الحفاظ على السلامة الوظيفية والهيكلية لهذه البروتينات.

تم حساب المتوسطات والانحرافات المعيارية (المشار إليها على شكل أشرطة) وقيم p الإحصائية لأهمية الاختلاف في Graphpad Prism. تم تطبيق ANOVA ثنائي الاتجاه مع اختبار Sidak اللاحق. لم يكن المتماثلان مختلفين إحصائيًا في التراكيب الجانبية.

إن الطبيعة الكارهة للماء للبروتين مهمة لوظيفة ببتيدات الإشارة لهذه المواد المسببة للحساسية [30]. آرا ح 2 و آرا ح 6 يتم تصنيعها في السيتوبلازم كبروتينات سليفة مع ببتيد إشارة حمض أميني إضافي N-terminal مطلوب للنقل إلى الفجوات [19 ، 30 ، 66]. تحتوي ببتيدات الإشارة (بقايا الأحماض الأمينية 1-7 [29] أو البقايا 1-21 [67] على فجوات ثنائية البقايا في آرا ح 2 وعرض عدد من الاستبدالات في كليهما آرا ح 2 و آرا ح 6 (الشكل 6 و S1 الشكل). على الرغم من هذه الطفرات ، ظلت المنطقة مقيدة بشدة للحفاظ على الخاصية الكيميائية الفيزيائية الكارهة للماء المطلوبة لوظيفتها الحاسمة (S1 الشكل). باختصار ، على الرغم من أن البروتينين المسببين للحساسية قد خضعوا لأنماط متناقضة من بدائل الأحماض الأمينية والخسائر / المكاسب على مدار التاريخ التطوري للجنس ، فقد حافظوا على تركيبة الأحماض الأمينية والمجموعات الكيميائية الفيزيائية المماثلة.

يظهر توزيع لكل كودون للطفرات المترادفة (الأحمر) والطفرات غير المترادفة (الرمادية) والطفرات (الزرقاء). يتم تمييز حلقات ربط IgE تحت بقايا الأحماض الأمينية. 5 أ. متماثل Ara h 2. 5 ب. متماثل Ara h 6.

تواقيع الانتقاء الطبيعي في آرا ح 2 و آرا ح 6

الأنماط الطفرية المتناقضة التي لوحظت في آرا ح 2 و آرا ح 6 (الشكلان 4 و 6 ، S1 الشكل) يثيران مسألة ما إذا كانت هذه الأنماط التطورية مدفوعة بالانتقاء الطبيعي أو التنويع الإيجابي أو التنقية السلبية. يعد تقييم تواقيع الانتقاء الطبيعي الذي يعمل على مناطق الجينوم المشفرة تحديًا كبيرًا. موريل وآخرون (2015) [45] أشار إلى أنه لا توجد حتى الآن طريقة غير مثيرة للجدل للإجابة على سؤال حول ما إذا كان الجين قد تطور في ظل الانتقاء الإيجابي. تشمل العوامل الأساسية التي تساهم في الصعوبات في تحديد توقيع الاختيار الإيجابي الأنماط الجوهرية لاستبدال الجينات والافتراضات البيولوجية والنماذج المستخدمة. لتقييم تواقيع الانتقاء الطبيعي المحتملة التي تعمل على آرا ح 2 و آرا ح 6نظرًا للاختلافات البارزة في الأنماط الطفرية ، فقد اخترنا وعارضنا نتائج ثلاث طرق مستقلة (تعتمد على المسافة ، و BUSTED ، و FUBAR) تعتمد افتراضات بيولوجية مختلفة وتستخدم مقاييس لتقدير الجينات الخاص بالموقع أو لتقدير توقيعات الانتقاء الطبيعي.

إحدى أبسط الطرق هي طريقة Nei و Gojobori (1986) [43] التي تركز على اكتشاف الانتقاء الطبيعي باستخدام معدلات البدائل المترادفة مقابل غير المرادفة في جينات ترميز البروتين. تحسب الخوارزميات التباين والتباين في طفرات dS (مرادف) و dN (غير مترادفة) ونسب الفروق المترادفة (pS) وغير المجهولة (pN). باستخدام SNAP لهذه الحسابات ، فإن متوسطات جميع المقارنات الزوجية لـ آرا ح 2 أظهرت مجموعة البيانات أن dS = 0.0142 ، و dN = 0.0475 ، و dS / dN = 0.3319 ، و pS / pN = 0.3379. في المقابل ، فإن آرا ح 6 كشفت مجموعة البيانات أن dS = 0.0831 ، و dN = 0.0247 ، و dS / dN = 5.8627 ، و pS / pN = 5.5914. 0.332 dS / dN لـ آرا ح 2 يعني أنه قد اختبر اختيارًا إيجابيًا على طول التاريخ التطوري للجنس بينما تم حساب 5.863 dS / dN لـ آرا ح 6 يشير إلى تنقية الاختيار. تشير قيمة dS / dN الأقل من 1 إلى الاختيار الإيجابي / المتنوع بينما تشير القيمة فوق 1 إلى تحديد الاختيار (يتم تقديم إخراج SNAP على أنه dS / dN وليس dN / dS). أبلغت BUSTED ، وهي طريقة تركز على الاختيار الإيجابي على مستوى الجينات ، عن أدلة على الاختيار التنويع العرضي على مستوى الجين في آرا ح 2 عبر فروع نسالة (ص = 0.005 0.05) ولكن لا يوجد دليل على التنويع العرضي في الاختيار في آرا ح 6 (ص- القيمة = 0.151 × 0.05). لذلك ، فإن نتيجة BUSTED تتفق مع نهج Nei و Gojobori (1986) ، حيث أظهر كلاهما ذلك آرا ح 2 يواجه اختيارًا إيجابيًا. آرا ح 6، من ناحية أخرى ، تبين أنه قيد التنقية باستخدام نهج Nei و Gojobori (1986) (اختبارات BUSTED للاختيار الإيجابي).

تم اكتشاف طريقة FUBAR الخاصة بالموقع والمستندة إلى Bayesian في آرا ح 2 تنويع الاختيار وتنقية الاختيار في 5 مواقع لكل منها 0.9 احتمال لاحق. ل آرا ح 6، اكتشفت هذه الطريقة تنويع الاختيار في موقعين ولكن تنقية الاختيار في 8 مواقع (الاحتمال اللاحق 0.9). يتم تمييز المواقع المكتشفة في جدول S3. FUBAR (Murrell et al. 2013) [46] لديه قوة أكبر لاكتشاف الانتقاء الإيجابي الضعيف (عند مستوى منخفض ω& قيم gt1). على النقيض من الطرق على مستوى الجين والطرق الخاصة بالموقع المستخدمة هنا ، يُعتقد أن طرق الجين الواسعة أكثر فاعلية في اكتشاف توقيعات الانتقاء الطبيعي. موريل وآخرون (2013) [46] لاحظ أنه عندما يكون الاختيار الإيجابي غير قابل للكشف في أي موقع أو فرع كودون واحد في عزلة ، فإن تجميع الأدلة للاختيار الإيجابي عبر مواقع وفروع متعددة يمكن أن يجعل تأثيرها التراكمي أكثر وضوحًا. تم التوصل إلى استنتاجات مماثلة من قبل الآخرين [68 ، 69]. يبدو أن هذا هو الحال في الكشف عن الاختيار الإيجابي بالطرق على مستوى الجينات المستخدمة في هذه الدراسة. في الختام ، أظهرت المقاربات على مستوى الجينات ذلك آرا ح 2 يتطور في ظل الاختيار الإيجابي / المتنوع. أظهرت مقاربتا Nei و Gojobori (1986) [43] و FUBAR (اختبارات BUSTED للاختيار الإيجابي) أن آرا ح 6 يتطور في ظل الاختيار السلبي / المنقي. اكتشفت FUBAR مواقع تحت التحديد الإيجابي في كليهما آرا ح 2 و آرا ح 6 ولكن المزيد من المواقع قيد التحديد في آرا ح 6 (موقعان مقابل 8 مواقع ، على التوالي). تثير هذه النتائج أسئلة غريبة حول ما إذا كان الاختيار الإيجابي في آرا ح 2 لعبت دورًا في ظهور الأشكال المناعية ، في حين تنقية الانتقاء في آرا ح 6 حافظ على وضع que لجين ظهر في البداية بخصائص مسببة للحساسية عندما أراشيس تباعدت عن أصلها المشترك.

لتقييم النتائج المحتملة للاختيار الإيجابي المكتشف في آرا ح 2، هناك مفهومان يحتاجان إلى المعالجة. يتعلق أحدهما باكتشاف الزيادة التدريجية في الحساسية عبر التاريخ التطوري للجنس والآخر يتعلق بمزايا تكيفية محتملة للحساسية. نظرة ثاقبة على العلاقة بين التوسع التدريجي للمنطقة التي تشمل الحلقات المناعية 6 و 7 و 7 ب ، بما في ذلك الإضافات التدريجية لأشكال DPYSPS في آرا ح 2 (الشكل 2) وتعزيز الحساسية يتم توفيره من خلال تجارب اللطخة المناعية. كشفت هذه التجارب (المفصلة لاحقًا) عن زيادة تدريجية في الحساسية من الأنواع القاعدية أ. تريسميناتا إلى الأنواع النهائية في شجرة النشوء والتطور ، أ. hypogaea. تتوافق التغييرات مع توسعات منطقة الأشكال المناعية (الشكل 2) ، مما يشير إلى ارتباط محتمل بين الظاهرتين. النقطة الثانية التي يجب معالجتها هي توافر الأدلة على المزايا التكيفية التي قد تمنحها الحساسية لبذور الفول السوداني. دراسات تجريبية مباشرة تتناول هذا السؤال في الأنواع البرية أراشيس غير متوفرة في الأدب. ومع ذلك ، يوجد بعض العمل الذي يربط بين البروتينات المسببة للحساسية والدفاع ضد الحشرات ومسببات الأمراض. آرا ح 2 هو أحد مثبطات التربسين [7] وقد ثبت أن هذه الوظيفة تتحكم في هجمات الحشرات ، وهي ميزة تُستخدم في برامج التربية لتحمل الحشرات أثناء تخزين البذور [70]. عائلة بروتين الألبومين 2S ، التي آرا ح 2 و آرا ح 6 تنتمي ، أثبتت فعاليتها في تثبيط نمو الفطريات والبكتيريا في بذور الفجل وأربعة أعضاء آخرين من عائلة الخردل Brassicaceae [71]. وبالمثل ، فإن الخصائص المضادة للفطريات معروفة بكونها بروتين متماثل من الألبومين 2S من بذور فاكهة العاطفة [72]. بالنظر إلى هذه النتائج في الفول السوداني والنباتات المزهرة الأخرى ، فإن ضغط الاختيار الإيجابي / المتنوع الذي يعزز زيادة الحساسية قد يكون مفيدًا لزيادة فرص بقاء البذور عن طريق الحماية من الحشرات والفطريات. تم توثيق أنماط التطور الجزيئي في آرا ح 2 وتشجع الزيادة التدريجية المقابلة في الحساسية التي تم حلها في الكتل المناعية الدراسات المباشرة على بذور الأنواع البرية لتقييم المزايا الانتقائية للحساسية البروتينية.

تقييم النشوء والتطور للحواتم

يمكن أن يكون لنمط الاستبدال (الطفرات والبدائل غير المرادفة) آثار هيكلية ووظيفية مزدوجة في جينات ترميز البروتين. في الجينات المسببة للحساسية ، قد تؤثر الاستبدالات غير المرادفة في الأقسام الغنية بالحلقات أو مضاعفات الحواتم المسببة للحساسية بشكل كبير على الحساسية [14 ، 17 ، 30]. لقد ثبت في الفول السوداني أن استبدال البقايا المفردة يعبر عن انخفاض بنسبة تصل إلى 99٪ في الحساسية من خلال التأثير على قدرة الارتباط بالـ IgE [14 ، 31 ، 32]. سوف نناقش ضمن منصة التطور النشئي الأحداث الطفرية في الحلقات المسببة للحساسية من المتماثلين. تحديد آرا ح 2 و آرا ح 6 تعتمد الحلقات عبر الجنس على حواتم معترف بها في المحصول وأسلافها المفترضة بواسطة Staley et al. (1997) وراتنابارخ وآخرون. (2014) [14 ، 29].

ال آرا ح 2 متماثل

تم التعرف على عشرة حواتم في آرا ح 2 [14]. الحلقات 6 و 7 فريدة من نوعها لهذا المتماثل وتحتوي على شكل سداسي الببتيد المناعي المميز DPYSPS (الشكل 2 و S1 الشكل) الموجود بين الحلزونات 2 و 3. المناطق (الحلقات 8-10). الحلقات 1-4 (HASARQQWEL ، QWELQGDR ، DRRCQSQLER ، LRPCEQHLMQ ، على التوالي) ، والحلقات 8-10 (LQGRQQ ، KRELRN ، QRCDLDVE ، على التوالي) يتم حفظها بالكامل عبر أراشيس (الشكل S1). على النقيض من ذلك ، خضع Epitope 5 (KIQRDEDS) لأحداث طفرة معقدة. على الرغم من أن شكل KIQR الخاص به لم يتغير في جميع أنحاء الجنس ، إلا أن القطاع المتبقي (DEDS) قد استوعب عددًا من الطفرات والإندلس عبر تاريخ الجنس ، ويظهر على أنه DQD-Q و DED-S (تشير الشرطات إلى الفجوات) في الطبقة القاعدية من أ. مايدوي, أ. lutescens، و أ. تريسميناتا، التحور إلى DQS— ، EED-Q ، DEDSS في أنواع السلالات اللاحقة ، والعودة إلى التسلسل الأصلي لـ DED-S في المحصول والأنواع المرتبطة به من النسب النهائي (الشكل 1 و S1 الشكل). من الجدير بالذكر أن تباعد مبكر أ. تريسميناتا باستخدام DQS المقطوع — أظهر الحافز أدنى درجة من الحساسية في تجربتنا المناعية مقارنة بالفول السوداني (الشكل 7 ، الموضح أدناه). هذه الطفرات الطبيعية لديها القدرة على تقديم إرشادات قيمة لفحص تأثير طفرات الخسارة / الكسب والمخلفات على الحساسية.


معلومات الكاتب

أشرف هؤلاء المؤلفون بالاشتراك على هذا العمل: هيو هـ. ريد وجيمي روسجون.

الانتماءات

برنامج العدوى والمناعة وقسم الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية ، معهد اكتشاف الطب الحيوي ، جامعة موناش ، كلايتون ، فيكتوريا ، أستراليا

جان بيترسن ، لورا تشاشي ، ماي تي تران ، خاي لي لوه ، ناثان بي كروفت ، أنتوني دبليو بورسيل ، هيو إتش ريد وأمبير جيمي روسجون

مركز التميز التابع لمجلس البحوث الأسترالي في التصوير الجزيئي المتقدم ، جامعة موناش ، كلايتون ، فيكتوريا ، أستراليا

يان بيترسن ، لورا سياشي ، هيو هـ. ريد وأمبير جيمي روسجون

قسم أمراض الدم المناعي ونقل الدم ، المركز الطبي لجامعة ليدن ، ليدن ، هولندا

إيفون كوي وينكيلار وأمبير فريتس كونينج

معهد والتر وإليزا هول للبحوث الطبية ، باركفيل ، فيكتوريا ، أستراليا

ميليندا واي.هاردي وأمبير جيسون أيه تاي دين

قسم البيولوجيا الطبية ، جامعة ملبورن ، باركفيل ، فيكتوريا ، أستراليا

ميليندا واي.هاردي وأمبير جيسون إيه تاي دين

قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، معهد بيتر دوهرتي للعدوى والمناعة ، جامعة ملبورن ، ملبورن ، فيكتوريا ، أستراليا

Zhenjun Chen وأمبير جيمس مكلوسكي

إيموسانت ، كامبريدج ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية

قسم أمراض الجهاز الهضمي ، مستشفى ملبورن الملكي ، باركفيل ، فيكتوريا ، أستراليا

معهد العدوى والمناعة ، كلية الطب بجامعة كارديف ، كارديف ، المملكة المتحدة

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

يمكنك أيضًا البحث عن هذا المؤلف في PubMed Google Scholar

مساهمات

J.P.، H.H.R.، L.C.، MT.T.، K.-L.L.، Y.K.-W.، NPC و M.Y.H. ساهم في توليد البيانات وتحليلها. ز. و JM الكواشف الرئيسية. R.P.A.، A.W.P.، J.A.T-D. و ف. ساهم في تحليل البيانات وكتابة المخطوطات. سمو و J.R. هما مؤلفان مشتركان رفيعان ومناظران ، وصمموا الدراسة ، مع J.P. ، وقاموا بتحليل البيانات وشاركوا في كتابة المخطوطة.

المؤلفون المراسلون


الملخص

تستخدم البكتيريا رسلًا كيميائيًا قابلًا للانتشار ، يُطلق عليه اسم الفيرومونات ، لتنسيق التعبير الجيني والسلوك بين الخلايا في المجتمع من خلال عملية تُعرف باسم استشعار النصاب. الفيرومونات للعديد من البكتيريا موجبة الجرام ، مثل عصية و العقدية، هي ببتيدات خطية صغيرة تفرز من الخلايا ويتم اكتشافها لاحقًا بواسطة المستقبلات الحسية مثل تلك التي تنتمي إلى عائلة كبيرة من بروتينات RRNPP. هذه البروتينات هي مستقبلات فرمون السيتوبلازمي تشترك في مجال ربط فرمون مماثل هيكليًا يعمل بشكل خافت لتنظيم نشاط المستقبلات. قدمت الهياكل البلورية للأشعة السينية لأعضاء RRNPP النموذجيين رؤى على المستوى الذري في آليتها وتنظيمها بواسطة الفيرومونات. تقدم هذه المراجعة نظرة عامة على إشارات النموذج الأولي RRNPP تصف بنية ووظيفة عائلة البروتين هذه ، والتي تنتشر على نطاق واسع بين البكتيريا موجبة الجرام وتقترح طرقًا لاستهداف أنظمة RRNPP من أجل التلاعب بالسلوكيات البكتيرية المفيدة والضارة.


بالنسبة إلى أجهزة المناعة النباتية والحيوانية ، تتجاوز أوجه التشابه الإحساس

تراكب مجالات HeLo للنبات (أصفر) ، الإنسان (أزرق) ، والماوس MLKL (وردي). الائتمان: تاكاكي مايكاوا

على الرغم من الاختلاف العميق من حيث علم وظائف الأعضاء والموئل والاحتياجات الغذائية ، فإن النباتات والحيوانات تواجه مشكلة وجودية مشتركة واحدة: كيف تحافظ على سلامتها في مواجهة التعرض المستمر للكائنات الحية الدقيقة الضارة. تشير الدلائل المتزايدة إلى أن النباتات والحيوانات قد طورت بشكل مستقل مستقبلات مماثلة تستشعر جزيئات الممرض وتبدأ الاستجابات المناعية الفطرية المناسبة.

الآن ، في دراسة نشرت في المجلة مضيف الخلية والميكروباكتشف المؤلف الكبير Takaki Maekawa جنبًا إلى جنب مع المؤلفين المشاركين ليزا ك.مهدي ، ومنغهانغ هوانغ ، وشياوكسياو زانغ وزملاؤهم أن النباتات قد طورت عائلة من البروتينات التي تشبه بشكل مذهل بروتينات تسمى بروتينات شبيهة بمجال كينيز (MLKLs). ) ، والتي تؤدي إلى موت الخلايا في الفقاريات كجزء من الاستجابة المناعية. في الكشف عن عائلة جديدة مهمة من البروتينات المناعية النباتية وتوصيفها ، تقدم دراسة المؤلفين ، التي تضمنت التعاون مع زملائهم الباحثين في MPIPZ بول شولز ليفرت ، وجين باركر وجيجي تشاي ، رؤى جديدة مثيرة للاهتمام حول كيفية حماية النباتات لأنفسها من الغزاة الميكروبيين.

غالبًا ما يصاحب موت الخلايا المنظم المناعة ضد العدوى في النباتات والحيوانات والفطريات. تشير إحدى النظريات المنتشرة إلى أن استجابات موت الخلايا الموضعية للغاية تعمل على الحد بشكل صارم من انتشار العدوى. على الرغم من أن هذه الاستجابة المشتركة تبدأ من أصول مستقلة ، يبدو أنها تتضمن أيضًا آلية متشابهة للغاية: تحتوي العديد من البروتينات المشاركة في موت الخلايا في ممالك مختلفة للحياة على ما يسمى بمجال HeLo ، وهو هيكل حزمة يتكون من أربعة حلزونات ، والتي تسبب المقاومة والخلية. الموت عن طريق الإخلال بسلامة الأغشية الخلوية أو تكوين قنوات أيونية.

بناءً على أوجه التشابه بين أجهزة المناعة الحيوانية والنباتية وعلى الدور الرئيسي الذي تلعبه مجالات HeLo في موت الخلايا ، افترض Maekawa أن النباتات قد تحتوي أيضًا على بروتينات أخرى ذات مجالات HeLo. من خلال استخدام المعلومات الحيوية والتحليل الهيكلي ، اكتشف هو وفريقه عائلة جديدة من البروتينات التي تحتوي على مجال HeLo والتي يتم مشاركتها على نطاق واسع بين الأنواع النباتية المختلفة ، مما يشير إلى أنها مهمة لفيزيولوجيا النبات.

أطلق Maekawa على البروتينات MLKLs ، ولمزيد من الدراسات ركز على MLKLs المعبر عنها في نموذج نبات Arabidopsis thaliana. قام هو وفريقه بعزل بروتينات MLKL من A. thaliana وقرروا أن MLKLs النباتية تمتلك نفس بنية البروتين الكلية مثل نظيراتها الفقارية وتتجمع أيضًا في هياكل رباعية ، من المحتمل أن تكون مثبطة تلقائيًا ، عندما لا تكون نشطة. الأهم من ذلك ، أن MLKLs النباتية تلعب أيضًا دورًا في المناعة ، حيث أن النباتات التي تحور فيها الجينات التي تشفر هذه البروتينات وبالتالي غير وظيفية كانت عرضة للإصابة بمسببات الأمراض.

كشفت التحقيقات الإضافية عن أوجه تشابه إضافية مع MLKLs الفقارية: يتم نقل MLKLs النباتية أيضًا إلى الأغشية الخلوية كجزء من وظيفتها ، ويؤدي تنشيط هذه البروتينات إلى موت الخلايا. يهدف Maekawa الآن إلى اكتشاف التفاصيل الجزيئية الكامنة وراء وظيفة MLKLs النباتية في المناعة: "سيكون من المثير الكشف بالضبط عن كيفية تنشيط MLKLs عند الإصابة بمسببات الأمراض وكيف يتم ترجمة هذا التنشيط إلى حماية فعالة للنبات."


عائلات البروتينات المسببة للحساسية الغذائية وخصائصها الهيكلية وتطبيقها في تشخيص حل المكونات: بيانات جديدة من مشروع EuroPrevall

تم تحديد ووصف عدد كبير من مسببات الحساسية الغذائية القادرة على إحداث أعراض الحساسية لدى الأفراد المعرضين للإصابة ، بما في ذلك ردود الفعل الشديدة ، وحتى التي تهدد الحياة. ومع ذلك ، فإن البروتينات القادرة على إحداث مثل هذه التفاعلات بوساطة IgE يمكن تخصيصها لعدد محدود فقط من عائلات البروتين. ستساعد المعرفة التفصيلية حول خصائص مسببات الحساسية الغذائية ، وهياكلها ثلاثية الأبعاد ، ونشاطها البيولوجي واستقرارها ، على تحسين تشخيص حساسية الطعام ، وتجنب أنظمة الاستبعاد غير الضرورية وتقييم مخاطر الحساسية التفاعلية لمصادر الطعام الأخرى. هذه المراجعة مخصصة لتلخيص المعرفة الحالية حول أهم عائلات البروتينات المسببة للحساسية الغذائية ولتقديم البيانات من مكتبة EuroPrevall المسببة للحساسية ، وهي مجموعة إثبات مفهوم لمسببات الحساسية الغذائية عالية النقاء والمميزة والموثوقة من مصادر الغذاء الحيوانية والنباتية لتسهيل تحسين تشخيص الحساسية الغذائية.

مصادر مسببات الحساسية الغذائية ذات الصلة

هذه معاينة لمحتوى الاشتراك ، والوصول عبر مؤسستك.


أساليب

الحيوانات

أنثى فئران BALB / ج ، تتراوح أعمارها بين 8 و 12 أسبوعًا (ن= 12 لكل مجموعة) ، تم شراؤها من Charles River Laboratories (Saint-Constant ، كيبيك ، كندا) وتم إيواؤها في ظروف خالية من مسببات الأمراض خاضعة للرقابة البيئية لمدة أسبوع واحد قبل الدراسة ، وطوال التجارب. تمت مراجعة جميع الإجراءات والموافقة عليها من قبل مجلس أخلاقيات أبحاث الحيوان في جامعة ماك ماستر.

الحساسية والتعرض للحساسية

تم توعية الفئران وتعريضها لـ OVA و HDM أو مزيج من اثنين من مسببات الحساسية (HDM و OVA) وفقًا لبروتوكولات التعرض لمسببات الحساسية المزمنة (الشكل 1) (Inman et al.، 1999 Leigh et al.، 2002 Leigh et al. Leigh et al.، 2004a Leigh et al.، 2004b Southam et al.، 2007).

التعرض OVA

تم توعية جميع الفئران التي تلقت OVA بـ OVA من خلال الحقن داخل الصفاق (IP) في اليوم الأول متبوعًا بكل من الحقن IP والتركيب داخل الأنف (IN) في اليوم الحادي عشر. إلى 6.5 ، ثم الطرد المركزي وإعادة تعليق الحبيبات في محلول ملحي ، متبوعًا بحقن 200 ميكرولتر IP. تبع ذلك خمس فترات من التعرض لـ IN OVA ، كل أسبوعين على حدة. خلال كل فترة يومين ، تم إعطاء OVA في أيام متتالية بتركيز 100 ميكروغرام / 25 ميكرولتر. تلقت الفئران التي تلقت OVA أيضًا تعرضًا زائفًا لمسببات الحساسية HDM (في شكل IN SAL) ، وفقًا لبروتوكول التعرض لـ HDM (الشكل 1).

التعرض لـ HDM

استخراج HDM من ملفات Dermatophagoides pteronyssinus (Greer Laboratories ، Lenoir ، NC) تم تعليقه بمحلول ملحي معقم من الفوسفات للوصول إلى تركيز 15 ميكروغرام / 25 ميكرولتر ، والذي تم فصله وتجميده لاحقًا عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. تم إذابة HDM عند 4 درجات مئوية خلال الليل ليتم إدارته في اليوم التالي. تم تعريض جميع الفئران التي تلقت HDM في البداية لمسببات الحساسية من خلال تركيب 25 ميكرولتر (15 ميكروغرام / 25 ميكرولتر) IN ، لفترتين كل منهما 5 أيام (الأيام 29-33 و 36-40). تبع ذلك فترة 8 أسابيع من التعرض لـ HDM ، حيث تعرضت الفئران خلالها لـ IN HDM ثلاث مرات في الأسبوع ، في كل يوم آخر من أيام الأسبوع (الاثنين والأربعاء والجمعة) ، بدءًا من اليوم 43. الفئران التي تتلقى HDM أيضًا تلقيت التعرض الزائف لمسببات الحساسية OVA (في شكل IN SAL) ، وفقًا لبروتوكول التعرض OVA (الشكل 1).

التعريض الضوئي لـ HDM-OVA (مجموعة)

باستخدام نفس طرق الإعطاء المستخدمة لمسببات الحساسية المفردة وحدها ، تم توعية جميع الفئران التي تلقت مزيج HDM و OVA لأول مرة تجاه OVA ، وبعد فترة راحة مدتها 16 يومًا (الأيام 12-28) ، تعرضت لـ HDM في 5 أيام في الأسبوع لمدة أسبوعين. في دراسة تجريبية أجريت قبل الدراسة الحالية (البيانات غير معروضة) ، حاولنا توعية الفئران لكل من مسببات الحساسية في وقت واحد. ومع ذلك ، أدى ذلك إلى اعتلال الصحة والوفاة. لذلك ، كانت فترة الراحة لمدة 16 يومًا بين التحسس لكل مادة مسببة للحساسية ضرورية لضمان بقاء الفئران بصحة جيدة أثناء مرحلة التحسس. بعد التحسس ، تعرضت الفئران لكل من OVA و HDM ، والجمع بين بروتوكولي التعرض لمسببات الحساسية (الشكل 1).

التعرض الشام (فئران التحكم بالمحلول الملحي)

تم توعية الفئران الضابطة وتعريضها لـ SAL (25 ميكرولتر IN) باتباع نفس بروتوكولات مسببات الحساسية المزمنة الموضحة في الشكل 1 وباستخدام نفس طرق الإعطاء.

قياسات النتائج

تم إجراء قياسات النتائج في نقطتين زمنيتين: 24 ساعة بعد التعرض النهائي لمسببات الحساسية ، للتحقق من الارتباط بين التهاب مجرى الهواء و AHR ، وفي 4 أسابيع بعد التعرض النهائي لمسببات الحساسية ، للتحقق من الارتباط بين إعادة تشكيل مجرى الهواء و AHR في وقت عندما وقد هدأ التهاب مجرى الهواء تمامًا (الشكل 1). تم تقييم قياسات النتائج في ثماني مجموعات من الفئران ، تتكون من أربع مجموعات مختلفة من الفئران في كل من النقطتين الزمنيتين. كانت المجموعة 1 عبارة عن فئران تحكم تعرضت لـ SAL ، وكانت المجموعة 2 عبارة عن فئران تعرضت لـ OVA ، وكانت المجموعة 3 عبارة عن فئران تعرضت لـ HDM والمجموعة 4 تعرضت لمجموعة من مسببات الحساسية (HDM و OVA) (ن= 12 فأر لكل مجموعة). كان قياس النتيجة الأولية في كلتا النقطتين الزمنيتين تقييمًا في الجسم الحي لاستجابة مجرى الهواء (RRS إلى MCh). تضمنت قياسات النتائج الإضافية في كلتا النقطتين عددًا إجماليًا وتفاضليًا للخلايا (الحمضات ، العدلات ، الخلايا الليمفاوية والضامة) في سائل BAL ، وقياس شكل مجرى الهواء باستخدام نظام تحليل الصور القائم على الكمبيوتر (Northern Eclipse ، الإصدار 7.0 Empix Imaging Inc. ، Mississauga ، أونتاريو ، كندا) لتحديد عدد الخلايا البدينة في منطقة معينة من أنسجة الرئة. تضمنت قياسات النتائج الإضافية التي تم إجراؤها في 4 أسابيع بعد التعرض النهائي لمسببات الحساسية استدعاء الخلايا الطحالية لـ T.ح2 سيتوكين IL-4 ، لتأكيد التحسس لمسببات الحساسية ، وقياس شكل مجرى الهواء باستخدام الكسوف الشمالي لتحديد التغيرات الهيكلية المستمرة في مجرى الهواء.

استجابة مجرى الهواء

تم تقييم استجابة مجرى الهواء عن طريق قياس RRS الاستجابة للجرعات المتزايدة من MCh في الوريد باستخدام جهاز التنفس الصناعي للحيوانات الصغيرة المرنة (SCIREQ ، مونتريال ، كندا) ، كما هو موضح سابقًا (Hirota et al. ، 2006).

استدعاء الطحال

تم إجراء استدعاء الخلايا الطحالية كما هو موضح سابقًا (جونسون وآخرون ، 2004). باختصار ، تم حصاد الطحال وعزل الطحال وتخفيفه إلى تركيز 8 × 10 6 خلايا / مل في RPMI كاملة. تم استنبات الخلايا الطحالية في RPMI كاملة بمفردها ، أو في RPMI كاملة مكملة إما بـ OVA (40 ميكروغرام / مل) أو HDM (40 ميكروغرام / مل) في لوح مسطح القاع ، 96 بئر (بيكتون ديكنسون) في رباعي مضاعفات. بعد 5 أيام من الاستنبات ، تم حصاد المواد الطافية وتم تجميعها وتجميدها الرباعي عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى تصبح قياسات السيتوكين جاهزة.

تحليل السيتوكين

تم قياس مستويات IL-4 في المادة الطافية لثقافة الطحال باستخدام مجموعة ELISA لـ IL-4 (Quantikine R & ampD Systems ، مينيابوليس ، مينيسوتا).

جمع وتحليل السوائل BAL

تم جمع سائل BAL على النحو الموصوف سابقًا (Inman et al.، 1999 Leigh et al.، 2002 Leigh et al.، 2004c Leigh et al.، 2004a Leigh et al.، 2004b Southam et al.، 2007). تم إجراء تعداد الخلايا التفاضلية على 400 خلية. تم تصنيف الخلايا ، على أساس المعايير المورفولوجية ، مثل الحمضات ، العدلات والخلايا الليمفاوية.

أنسجة الرئة والقياس التشكل

تم إجراء نسيج الرئة وقياس الشكل كما هو موصوف سابقًا (Ellis et al.، 2003 Inman et al.، 1999 Leigh et al.، 2002 Leigh et al.، 2004c Leigh et al.، 2004a Leigh et al.، 2004b Southam et al. ، 2007). باختصار ، تم قطع أقسام الرئة بسمك 3 ميكرومتر وتلطيخها بـ: PSRed لتحديد وجود الكولاجين تحت الظهاري ، PAS لإثبات وجود خلايا الكأس ، و Toluidine Blue لإثبات وجود الخلايا البدينة. تم تحضير أقسام إضافية للتلميع المناعي باستخدام جسم مضاد أحادي النسيلة ضد α-SMA (Clone 1A4 ، DAKO ، الدنمارك) لتحديد كمية البروتينات المقلصة للعضلات الملساء ألفا في مجرى الهواء. تم إجراء القياس الكمي المورفومتري لأقسام الرئة الملطخة باستخدام نظام تحليل الصور الرقمية المخصص (الكسوف الشمالي). تم إجراء التحديد الكمي للخلايا البدينة ، والذي لم يتم وصفه مسبقًا ، عن طريق جمع صورة لقسم الأنسجة الملطخة بالكامل تحت هدف 1 × لحساب مساحة أنسجة الرئة. قام فرد أعمى عن رموز الدراسة بعد ذلك بحساب جميع الخلايا البدينة تحت هدف 40 × وتم التعبير عن النتيجة على أنها MC / مم 2.

تحليل احصائي

يتم التعبير عن القيم على أنها تعني ± sem. تلاميذ ر- تم استخدام الاختبارات لمقارنة مستويات IL-4 ، تفاعل مجرى الهواء (منحدر RRSمنحنى الاستجابة للجرعة MCh) ، Max RRS، تعداد الخلايا الكلي والتفاضلي ، ومؤشرات إعادة تشكيل مجرى الهواء بين فئران التحكم في المياه المالحة والفئران التي تتلقى مسببات الحساسية. تم إجراء مقارنات بين مجموعات الفئران التي تتلقى مسببات الحساسية المفردة ومجموعة الفئران التي تتلقى مزيجًا من مسببات الحساسية باستخدام ANOVA (Statistica الإصدار 10.0). تم إجراء اختبار المقارنة المتعددة اللاحق باستخدام اختبار Duncan. كانت جميع المقارنات ثنائية الذيل و ص القيم الأقل من 0.05 اعتبرت ذات دلالة إحصائية.


شاهد الفيديو: Feiten u0026 Fabels @ Allergie-bestrijding (شهر اكتوبر 2022).