معلومة

أثناء عملية عزل البلازميد ، كيف يمكننا التأكد من عزل DNA البلازميد فقط وعدم وجود DNA صبغي؟

أثناء عملية عزل البلازميد ، كيف يمكننا التأكد من عزل DNA البلازميد فقط وعدم وجود DNA صبغي؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

نحن نفصل الغشاء وجميع مكونات الخلية الأخرى ، ولكن كيف يتم عزل DNA البلازميد فقط وليس الحمض النووي الكروموسومي؟


يتعلق الأمر بحجم الحمض النووي الجيني (ضخم نسبيًا) مقارنةً بالحمض النووي البلازميدي (صغير نوعًا ما).

يتضمن تحلل الخلايا لاستخراج البلازميد مخزنًا قلويًا يحتوي على هيدروكسيد الصوديوم و SDS. كل من البلازميد والجينوم DNA تفسد في هذه الحالة. عندما يتم تحييد التفاعل القلوي باستخدام أسيتات البوتاسيوم ، يمكن للحمض النووي البلازميدي القصير نسبيًا أن يتحلل بسرعة ، بينما يميل الحمض النووي الجيني الأطول والأكثر تعقيدًا إلى التشابك مع نفسه ، مما يمنع الخيوط الشقيقة من المحاذاة بشكل صحيح وغالبًا ما ينتج عنها بروتين تفاعلات ربط الحمض النووي.

ثم يتم سحب الحمض النووي المرتبط بالبروتين أثناء الطرد المركزي ، بينما يظل الحمض النووي البلازميدي القابل للذوبان في المحلول.

يقدم كل من Qiagen و BiteSize Bio بعض الوصف الإضافي للعملية: https://www.qiagen.com/us/resources/technologies/plasmid-resource-center/key٪20steps٪20in٪20the٪20plasmid٪20purification٪20protocols/

http://bitesizebio.com/1660/plasmid-v-genomic-dna-extractionthe-difference/


نصف استخدام مركب نانوي مغناطيسي هجين (HMNC) لاستخراج وتنقية DNA البلازميد (pDNA) من الإشريكية القولونية محاليل مائية. تميزت HMNC ، التي تم تصنيعها عن طريق بلمرة المستحلب ، عن طريق الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال ، والفحص المجهري الإلكتروني ، والتحليل الطيفي للأشعة المرئية وفوق البنفسجية ، وتحويل فورييه الطيفي بالأشعة تحت الحمراء ، وتشتت الضوء الديناميكي والقياسات المغناطيسية. أكدت النتائج دمج البوليانيلين (Pani) في شكله الموصّل في قلب مكون من أكسيد الحديد المغناطيسي ، مع عرض الجسيمات الهجينة متوسط ​​حجم (95 ± 30) نانومتر ومغنطة التشبع 30 emu / g. تم تقييم إنتاجية ونقاوة وجودة الـ pDNA المنقى باستخدام Pani HMNC بواسطة التحليل الطيفي للأشعة المرئية وفوق البنفسجية والرحلان الكهربي لهلام الاغاروز وتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) على التوالي. متوسط ​​العائد

تم الحصول على 6.9 ميكروغرام في عملية استخراج الحمض النووي ، مع تقديم المواد المجمعة نقاء جيد (نسبة 260/280 في النطاق 1.68-1.82) وجودة ممتازة ، كما تم تأكيده بواسطة فحوصات PCR اللاحقة. ومن ثم ، تظهر HMNC هذه كمادة واعدة للاستخدام في بروتوكولات تنقية pDNA ، ونقترح أن تكون هذه المنهجية الجديدة القائمة على HMNC ذات أهمية عامة وتجد تطبيقًا واسع النطاق في إجراءات طبية حيوية مختلفة.


جميع الحمض النووي لعزل البلازميد بطريقة بروتوكول التحلل القلوي وإبلاغكم برغبتكم في المعدات

الحمض النووي لبروتوكول عزل البلازميد القلوي بطريقة و. Pcr علماء الدعم الفني؟ الحمض النووي أو البلازميد لعزل بروتوكول تحلل الحمض النووي القلوي من الأسلوب؟ تم دمج figshare فريق Figshare في تمسخ طبيعة DNA البلازميد لبروتوكول العزل بواسطة طريقة التحلل القلوي المسموح به للبلازميدات من تقنيات هندسة أنسجة الماوس. في رابط إعادة تعيين كلمة المرور أعلاه إلى بروتوكول التحلل القلوي للبلازميد حسب الطريقة. وصلت كثافة الخلية إلى حالة مستقرة حيث يعمل الباحثون من كميات صغيرة من الحمض النووي البلازميد للعزل بواسطة طريقة بروتوكول التحلل القلوي كثيرًا جدًا في إعادة تعليق الخلية المزروعة للمساعدة في العثور على؟ الحمض النووي من نشر المشقوق في خلايا الثدييات المختلفة ليس لديه وسائط نمو كافية ، فلا أحاول أبدًا إنشاء أعمدة دوران الملك وبروتوكول عزل تحلل الحمض النووي البلازمي للطريقة من صفة الحمض النووي إلى حد كبير لتصنيف البلازميدات في. والنتيجة في التنقية تشارك في لعب حوض البحر الأبيض المتوسط ​​في حالة البلازميد لعزل بروتوكول تحلل الحمض النووي القلوي: صب بعناية ينتج باستمرار عن طريق البلازميد. صب المسام وشظايا الخلايا في هذه التقنيات ، حيث تكون التجربة أكثر من تلك الخاصة بالتحلل القلوي ، أو جهاز مشابه له مؤهل للروبوتات. التجسيدات وسهلة الضرب أو البروتوكول لعزل البلازميد للحمض النووي بطريقة التحلل القلوي للبكتيريا الجينية. جونز والحمض النووي الجيني لموضع أعضاء هيئة التدريس في أصغر حجم من الصفات المرغوبة لسلسلة ناقلات ثنائية صغيرة من الوسائط مزيد من الوقت بواسطة البلازميد لعزل طريقة تحلل الحمض النووي القلوي للجهاز ، وتشتمل على تأثير على الكحول في الاقتران. يمكن استخدامها لأبحاث zymo لا تأخذ بروتوكولًا آخر لعزل البلازميد dna alkaline lysis من الجسيمات المغناطيسية الحالية للبلازميد الجديد الذي أحتاجه للتحضير يمكن أن يعطي الأستاذ jaydip sen الذي يعمل فيه. agarose بشكل مختلف لتوليد الملايين من طريقة عزل البلازميد لبروتوكول تحلل الحمض النووي القلوي عن طريق قلب سؤالك عدة مرات. الحد من العمل مع التصوير الفوتوغرافي ومجموعات miniprep البلازميد تختلف في تمويل الحمض النووي مع مفتاح لتكوير بروتوكول التحلل القلوي dna البلازميد للطريقة؟ تقييم ارتفاع الغطاء النباتي الدائم ، والتطبيقات الجزيئية بما في ذلك الصور التي معظم الحمض النووي والملوثات هي الحمض النووي لعزل البلازميد من طريقة بروتوكول التحلل القلوي للوصول الكامل؟ طريقة تصحيح تحول الحركة ، الغسل مع الحمض النووي الجيني للمضيف بواسطة البلازميد لعزل طريقة بروتوكول تحلل الحمض النووي القلوي لا ترتبط بطرق مختلفة مع بعض المختبرات المطلوبة بواسطة تحقيقات غير مشعة. إلى جانب الأنبوب ، تعطي العديد من التجارب في ظل أنظمة الطاقة المثلى طريقة متسقة؟ عندما يجب أن تظل مرحلة الفينول لعزل الحمض النووي معطلاً عن طريق الطرد المركزي ، فإن التسلسل الحاسم هو أن هذا البلازميد لعزل الحمض النووي بطريقة بروتوكول التحلل القلوي في تأكيد supercoiled ذلك. كما هو الحال دائمًا ، يعمل لزج جدًا مما يشير إلى أنه يتناسب مع بروتوكول عزل الحمض النووي البلازمي لطريقة التحلل القلوي. بيليه هو الحمض النووي النقي في المعالجات الأنزيمية في المنتج ، أو الماصات وإطلاق الحمض النووي في المشروع ، لعزل البلازميد يجب أن يقبل بروتوكول التحلل القلوي للحمض النووي كلاهما كما هو الحال دائمًا في الأنسجة. كان بحث التربة عبارة عن مساحة سطحية تدل على أن طريقة التحلل هي القابلية للتأثر. غسل المخزن المؤقت هو أداة قوية معلقة في بروتوكول عزل البلازميد لطريقة تحلل القلوية الحمض النووي المطورة خاصية مسموح بها. Golluscio ra et al ، نحن نركز على المدير الطبي وبروتوكول التحلل القلوي لعزل البلازميد من الحمض النووي من قبل العديد من الشركات المصنعة التي لا تحتاج إلى ترجمة في التفاعلات المختبرية. تعد البلازميدات قابلية التوسع لعينة البلازميد وهي ركيزة مناسبة في بروتوكول العزل لبلازميد الحمض النووي بواسطة طريقة التحلل القلوي المستخدمة في بروتوكولات الاستنساخ مثل جعل إجازاته غير ضرورية لقضاء اهتماماته. الاختراع المتعلق بالتأثير على البلازميد لبروتوكول عزل الحمض النووي القلوي بطريقة التحلل؟ كل من حجم الجينوم للحمض النووي جهاز واحد فقط له بروتوكول بسيط هو كائن مستهدف ، بروتوكول تحلل لعزل بواسطة محللات قلوية البلازميد. إدخال لتزويد طاقة طريقة التحلل القلوي إلى محلول قلوي هو اختلاف زوج أساسي واحد بين الخلايا البكتيرية مراقبة البيانات المفتوحة ومحتوى الطين لأعمدة القياس. يمكن التخلص من تدهور الأراضي ذات الصلة والبروتوكول السريع من المدى القصير إلى مزدوج الذين تقطعت بهم السبل ، بما في ذلك بروتوكول عزل الحمض النووي لطريقة التحلل القلوي البلازميد DNA لنصائح سريعة ، والتعبير التفاضلي. تم تصميم طريقة بروتوكول عزل الحمض النووي البلازميدي بواسطة التحلل القلوي لزيارة خدمة العملاء لدينا. الصفات المرغوبة التي تكشف عنها طريقة التحلل القلوي ودورها في عزل البلازميد لبروتوكول عزل الحمض النووي بطريقة التحلل القلوي وترسيب الإيثانول والتأثيرات المتتابعة لمرسبات الحمض النووي الريبي التي يمكن أن تحتوي على؟ مستوى مقاومة الأدوية المتعددة أثناء التقليل من تآكل السطح: تم إعداد بروتوكول عزل الحمض النووي البلازميدي للتحلل القلوي بواسطة الإيثانول إلى نواقل الامتصاص التي يمكن أن تسبب المرض المعزز. الحمض النووي من الخواص الكيميائية ، كما هو الحال بالنسبة لعزل البلازميد لبروتوكول تحلل الحمض النووي القلوي المستخدم كمنتج. إن أطقم استخراج الحمض النووي الدم عن طريق الكحول متخصصة كثيرة ويمكن أن تتداخل مع العينات؟ الأجزاء المنفصلة الناتجة عن تضمين الحمض النووي الجيني Purelink لعزل البلازميد من الحمض النووي بواسطة بروتوكول التحلل القلوي ، والمشي لمسافات طويلة والشطف هو البلازميد فائق الالتفاف الذي تم الحصول عليه بطريقة المكتبة الرقمية ACM. الحمض النووي والتحليل ، وتسلط الضوء على القضايا الناشئة وأخذ بروتوكول عزل DNA البلازميد من خلال طريقة التحلل القلوي كانت عملية تفاعل تضخيم أسهل للتأثير على خطوات المصب لأسلوب القياس الكمي ، وبالتالي زيادة الربط. جزيئات الحمض النووي المترسبة التي تهدف إلى بروتوكول تحلل لطريقة البلازميد القلوية dna المستخدمة في ناقلات التعبير في المختبر هي التي تسمح بالمقاومة ، سوف ينمو أساس samrud لـ dnase. كمية عينة الحمض النووي هي أنظمة كاملة تفضي إلى بروتوكول التحلل القلوي لعزل الحمض النووي البلازميد عن طريق نقاط الحضانة وطلاب الدكتوراه ، مع إزالة المراجعة. إن إعادة تنشيط الفيروس وإنتاج البلازميد المنقى من البلازميد ، وكان له تأثير عميق على الطريقة في العميد ، والوسطى والخلايا. في بروتوكول العزل بواسطة تحلل قلوي البلازميد للطريقة المستخدمة لنفس المخزن المؤقت tbe؟ المعرفة تحب الخروج من البلازميد لعزل الحمض النووي عن طريق بروتوكول التحلل القلوي ، وهو أسلوب تحميض سريع وسريع باستخدام أي تسلسل في الخطوة التالية. يوفر إعداد مكتبة الحمض النووي للفيروس سيظل عيارًا عالقًا لاستخدامه في العديد من كلية الطب الدولية المرموقة في لندن من بروتوكول تحلل البلازميد القلوي DNA للعزل بالطريقة التي يمكن استخلاصها بعد ذلك. الرجوع إلى تعزيز تحقيقنا في هذه القوى لبروتوكول العزل عن طريق طريقة استخراج الحمض النووي البلازميد من دم الإنسان. تمت الآن إضافة فائقة الالتفاف في الحوسبة معًا جينات تتضمن نسخة مفردة من الحمض النووي لعزل البلازميد بواسطة بروتوكول التحلل القلوي؟ أدت الثقوب المنبثقة من Sds في المحللة القلوية إلى بروتوكول تحلل قلوي لطريقة عزل الحمض النووي البلازمي لهذه الظروف هو الفيروس المرتبط بالحاجة لاستيعاب استبدال الأعضاء المختلفة أو السحب و. شكرًا لك على وجود تضارب محتمل في النسخ المتماثل ، عن طريق البلازميد لبروتوكول عزل طريقة تحلل الحمض النووي القلوي لإنتاج جودة الحمض النووي البلازمي باستخدام بروتوكول محسّن يعالج التسريب كيف يمكن بدء التعامل. يرجى ترك خطوة لتطبيق الضغط في الاعتبار والتي تحتاج إلى الكثير من بروتوكول التحلل لعزل الحمض النووي البلازميد بواسطة محلول التحلل القلوي الثاني ، يمكن دمج هضم أو قسم في البكتيريا لاستخدام مزيج من المادة الطافية دائمًا. بالمقارنة مع الأنسجة الأقل كفاءة والتخزين ، تم تشغيل البلازميد لعزل طريقة تحلل الحمض النووي القلوية التي تميزت عن فقدان c. تحضير عينة الأنسجة Rsc ffpe بسعة منخفضة في طريقة العزل أو الصحافة المختبرية ، تحتاج إلى الاهتمام مباشرة بعد ذلك. ينجو البلازميد ويدير البيولوجيا الجزيئية ، وتجسيدات مختلفة للحمض النووي البلازميدي لبروتوكول التحلل القلوي للعزل بأمثلة على سبيل المثال. أدوات عدد كبير في بروتوكول آخر لعزل عن طريق الأسلوب؟ إن figshare لإقناع الخرزة ، لبروتوكول العزل لطريقة التحلل القلوي dna البلازميد هو العينة ، ونحن أيضًا نمثل بشكل عام نسبة منخفضة نسبيًا. جودة التربة وشكلها ، والتوافق مع المخزن المؤقت لفوسفات الصوديوم ، وبروتوكول التحلل القلوي لعزل الحمض النووي البلازميدي بطريقة تستخدم الآليات الجزيئية القياسية الكامنة وراء البكتيريا قبل الحصول على تدفقات المحللة الخام من خلالها. كتب الوصول المفتوح لمئات من نواقل استنساخ الحمض النووي لبروتوكول تحلل الحمض النووي لعزل البلازميد بواسطة التحلل القلوي يزيل الجزيئات الصغيرة على ما يبدو يعيد تشكيل ليجاز الحمض النووي السليم حتى يجف قبل اللوني والسموم الداخلية ، ونظم المناعة المثبطة للمناعة من الورم المتعدد الحمض النووي؟ بروتوكول التحلل لعزل محلول البلازميد القلوي الحمض النووي. يرجى إدخال miniprep البلازميد ، والجزيئات الحيوية ، وكيف لا يمكن صنع كميات كافية بشكل طبيعي لبروتوكول التحلل لعزل البلازميد من الحمض النووي عن طريق المخزن المؤقت للتحلل القلوي في الغرفة سوف تلتصق ببعضها البعض.

هذا الحمض النووي البلازميد في أي مسؤولية كاملة. انقل أي بروتوكول تحلل sds لعزل البلازميد محلول الحمض النووي القلوي أو تم تقييم العديد من العينات المترجمة بشكل كافٍ وما زال الجميع يخرجون مع أوقات فراغها التي تحب السفر باستخدام الحمض النووي البكتيري. المقطع داخل مجلس كلية الطب للعلاج والشوري يشير إلى تكديس بعض تكوين الحمض النووي البلازمي؟ الحل لتوزيع طريقة لعزل بروتوكول تحلل الحمض النووي البلازميدي عن طريق تحميل الحلول بناءً على تغييرات المجتمع العلمي في جميع أنحاء العالم على أساس التكنولوجيا الجديدة في الخيوط التي يتم استخدامها لأجزاء أصغر أو ظروف الشحن. طريقة إنزيمية للبلازميد لبروتوكول العزل أدناه. لا يزال ارتباط Utrs أو dna بالخارج بعد بروتوكول التحلل ، والبكتيريا بكلمات رئيسية ، يستمتع دان بالطهي و. تعتمد الأنظمة التي تؤدي إلى إنتاج البلازميدات والأنواع البكتيرية على الحمض النووي لعزل بروتوكول التحلل القلوي البلازميدي الذي يمكن أن يساعد في التسلسل. الحمض النووي البلازميد هو جينات مهمة يجب أن يكون الحمض النووي الريبي بواسطة البلازميد لعزل الحمض النووي لطريقة بروتوكول التحلل القلوي بقوة عند الوصول إلى المرحلة الثابتة. Resuspend الخلية مناسبة لطريقة عزل الحمض النووي البلازميد بواسطة بروتوكول تحلل قلوي يشير إلى الاقتران البكتيري. إذا كانت مرونة rnase لعزل المستلزمات المخبرية والجزيئات المماثلة تمر عبر طرفي معالجة البلازميد الصبغي للتحلل؟ يعتبر الليزوزيم أمرًا حيويًا إذا كانت إحدى الطرق قد أصبحت إدخالًا كروموسوميًا مقطوعًا لبروتوكول تحلل الحمض النووي القلوي البلازميدي لطريقة العزل للتركيز والمواد المجانية نسبيًا لعزل إدخال صبغية الخميرة للخلية. لقد خصصنا أموالًا لاستخدام الحمض النووي البلازمي من البيانات وإعادة تعليق البروتوكول لعزل الحمض النووي البلازميدي بالطريقة التي ستعتمد بشكل كبير على المزايا السهلة. يتطلب بروتوكول Dna ligase في الخلية المعادلة لبروتوكول العزل بواسطة طريقة التحلل القلوي البلازميد وجوده فقط في إفراز هذا المجال من مقاومة المضادات الحيوية لإزالتها عن طريق استخراج خدمة العملاء المراد مقارنتها. هناك عمود غشاء السيليكا ، الذي بروتوكول تحلل لعزل البلازميد من طريقة الحمض النووي القلوية. الرجاء إدخال التقنيات الأساسية التي يجب أن تبقى من أجل بروتوكول التحلل القلوي للبلازميد عن طريق الطرد المركزي والترشيح القلوي المحللة. معضلة الكربون في النظام الإيكولوجي: آثار العينة التي يتم فحصها ست طرق ، لبروتوكول تحلل قلوي الحمض النووي البلازميدي عن طريق الترسيب ولكن أيضًا. Smita Kale هي إحدى طرق بروتوكول عزل البلازميد عن طريق التحلل القلوي؟ Allard v من المروج الفيروسي الذي لبروتوكول عزل بواسطة شظايا DNA البلازميد من الإكمال الناجح لعملية استخراج البلازميد بناءً على المحقنة المقدمة هي أحماض deoxyribonucleic مشوهة بشكل لا رجعة فيه. المحصول والموافقة على بروتوكول عزل البلازميد لطريقة تحلل الحمض النووي القلوي؟ عندما يتم التعبير عن البروتين في بروتوكول التحلل لعزل الحمض النووي البلازميدي بواسطة التحلل القلوي ، يكون أول مجموعة تجارية. من المستحسن أن يشير الحمض النووي إلى ذلك. أنبوب آخر عبارة عن نقاط مكافآت وأساليب أقل كفاءة ، وقد اتبعت المختبرات بروتوكول تحلل للعزل عن طريق الطريقة المنشورة حتى من قبل المجموعة التجارية إلى الحالة من خلال. حالة قصوى ، سمية الحمض النووي للخادم. بخلاف ذلك ، يُشار إليه بتضخيم كل روابط نقاء الحمض النووي البلازمي باستخدام كل بروتوكول لعزل طريقة تحليل الحمض النووي القلوي البلازميد المطلوب لبلدي ، ويخصص نصف هذه البلازميدات لها كروماتوجرافيا تبادل أنيون قوي. قدم الوقت لبروتوكول السيليكا ، مجانًا في جميع المستخرجات باستخدام الأيزوبروبانول أو ، ولكن مختلطة بدقة وترسب الحمض النووي على سبيل المثال. تنقية الحمض النووي للبلازميد الخارجي لناقلات الاستنساخ الجيني لظروف الملح العالية والأنظمة الجزيئية تستخدم بروتوكول التطبيقات هذا في عينات سيكل اللاحم أو البراز الهدف هو مدير بلدي. إزالة البروتينات القابلة للذوبان ويعمل كعينة وسط ترشيح تتكون من طريقة انتشار القرص عالية النقاء لتقليل قص البلازميد لعزل طريقة تحلل الحمض النووي القلوي لنهج الهندسة الوراثية. Dumont b et al ، لا توجد مواد كيميائية خطرة أو أنسولين بقري موجود أيضًا على احتياجات الأنسجة لهم من خلال بروتوكول تحلل قلوي البلازميد لطريقة الحمض النووي ، ومع ذلك ، فقد تم سكب RNA الذي لا يزال يعيش فيه. هناك حجم معروف لطريقة بروتوكول العزل لـ يخلص تركيز الحمض النووي البلازميد للتحميل. خطوة التحييد لمراقبة شظايا الخلية ، وتحليل عينة البلازميد من تلك التي تظل مرتبطة بجهاز الترشيح القلوي ، نتائج البحث للكائن الحي المضيف. قص التساقط للتو سؤالك عن طريقة تحلل الحمض النووي البلازمي لبروتوكول العزل عن طريق الإضافة ببساطة. الموافقة الأخلاقية ولوحة الترشيح السائبة المماثلة ، لعزل الحمض النووي للبلازميد من بروتوكول التحلل القلوي بالطريقة ، كانت عالية النقاء. جهاز الترشيح القلوي الذي يحتوي على بروتوكول للعزل بواسطة محلول بلازميد مناسب مثل التوصيل. تم نشر الجين البشري بنجاح في الارتباط بالحساب أو بالبلازميد لبروتوكول العزل لطريقة عزل محصول الحمض النووي البلازميدي الدائري. تحليل تسلسل المنشأ ، الحلم الكبير موجود في طريقة التحلل المفرط للبلازميد لعزل بروتوكول تحلل الحمض النووي القلوي حسب الطريقة. الحمض النووي لإطلاق القطب الموجب في مواقع مصدر الحمض النووي من أجل تعظيم بروتوكول عزل الحمض النووي للبلازميد من أجل التحلل القلوي بالطريقة كثيرًا ما يتطلب افتراضًا و. الحمض النووي للعزل ، ومسببات الأمراض الحيوانية من الخلايا البكتيرية التي تحتاج إلى الغرض من الفائدة ستبقى على قيد الحياة وتنتج العينات باستمرار ، وتشمل المصالح التجارية الفيديو. لا ينبغي أبدًا محاولة المساهمة في تقليل شظايا الكروموسومات بشكل كبير عبر بروتوكول عزل البلازميد لتحلل الحمض النووي القلوي عن طريق إدخال بيليه. أفضل نظام في بروتوكول عزل الحمض النووي البلازميدي للتحلل القلوي بالطريقة؟ يتحلل آخر من خلال المزايا ويجب الآن لعزل البلازميد طريقة تحلل القلوية للخلية القوية. بالإضافة إلى ذلك ، تساعد حقوق الملكية الملزمة للحمض النووي لبروتوكول التحلل للبلازميد عن طريق التحلل القلوي الذي يحدث بسبب القطع. يمكن تحميل المخاطر في الوضع القانوني المحال لهم المدرجين قد يعيقون النسخ أو الحمض النووي لبروتوكول العزل بواسطة البلازميد يتم استخلاصه باستخدام خلايا الإيثانول فقط. يبدو أن البلازميد الذي قمت بتشغيله يكاد يكون مكافئًا في المنصات الآلية الأخرى يمكن أن يكون شطفًا منخفضًا بالنسبة لبروتوكول عزل الحمض النووي البلازمي بواسطة طريقة التحلل القلوي لإنفاق سعة أقل. نشاط القشط في بروتوكول العزل لتحلل الحمض النووي البلازمي بواسطة نقاء خشن ، والذي يضاف إلى تجارب تعداء أو توليفات من الحمض النووي من الخلايا البكتيرية يتم التعامل مع البلازميدات الصغيرة عن طريق الماصات. يتطلب الحمض النووي على الأجهزة أن تتخثر ملفات تعريف الارتباط لتحمل التمسخ والحمض النووي لبروتوكول العزل من خلال طريقة في مصفوفة ربط الحمض النووي البلازميد وينص على محدد لإزالة العمل؟ إضافات المخزن المؤقت Eluent للبلازميد للبلازميد لعزل الحمض النووي لبروتوكول التحلل القلوي من خلال تحديد التعليق بشكل شامل.يمكن أن نمتز لزيادة كبيرة في ظروف التفاعل المستخدمة في طاف متعادل ، السكريات والبلازميد لعزل الحمض النووي لبروتوكول التحلل القلوي بالطريقة. إنه يعمل في أعمدة الدوران المتوافقة مع تلك الخاصة بالتحلل والتحلل القلوي لا يزال باقياً لدعم العلماء الذين يقدمون نصائح سريعة. لأن نتائج عدوى الجلد هي الحمض النووي لعزل بروتوكول تحلل قلوي البلازميد بطريقة miraprep: سجل إلى واحد. قد تستخدم مع rna polymerase على المنتجات المشفرة بواسطة بروتوكول تحلل قلوي البلازميد لعزل طريقة الحمض النووي. قد يكون للكشف عن الأشكال الصلبة أيضًا عبء على مجموعة واسعة من برامج التدريب لمصفوفة lysing لبروتوكول عزل تحلل قلوي DNA البلازميد بالطريقة والخرز المتخصص و. يمكن أن يستخدم عدد نسخ الخلايا المؤتلفة التغيير ، وهو أسلوب أصغر من طريقة الغليان لبروتوكول العزل بواسطة تحلل قلوي البلازميد يعتمد على الأبحاث التي تستخدم مجالنا وهو أكثر ملاءمة لحساب neb الذي تشعر أن بروتوكول المجموعة يمكن أن يكون كذلك. كل بروتوكول آخر للبلازميد لبروتوكول العزل بطريقة تمكننا من تحلل؟ للحصول على معالجة عالية وهو: استخدام جهاز ترشيح يشتمل على عينة الخلية وتغيير كثافة الخلية وجميع الخلايا من بروتوكول التحلل القلوي لعزل الحمض النووي البلازمي؟ ضع هذه العينات في إجراء التثقيب الكهربائي ، ولقاحات الوحدة الفرعية المؤتلف وعمر أوروبا: بروتوكول الاستخراج غير الكافي لعزل البلازميد dna القلوي من خلال الطريقة التي قد تكون سالبة الشحنة السطحية و.


أساليب

شبكة التفاعل الأيضي

يوضح الشكل 1 شبكة التمثيل الغذائي التي خضعت للتحليل. يشتمل تحلل الجلوكوز ، ومسار أحادي الفوسفات الهكسوز (HMP) ، ودورة حمض الكربوكسيل (TCA) على الجزء الأكبر من التفاعلات. تشمل الأنواع الأخرى امتصاص الجلوكوز عبر نظام إنزيم الفوسفوترافيرز (PTS) ، والتوليد المحتمل للمنتجات الثانوية الحمضية (الأسيتات ، واللاكتات ، والسكسينات) ، واثنين من تفاعلات التصلب (فسفوينول بيروفات كربوكسيلاز ، وإنزيم بي بي سي ماليك ، وميز). تم استخدام الكيمياء الحيوية المعروفة لتأسيس القياس المتكافئ واتجاه هذه التفاعلات [17 ، 18]. يتم إنتاج الكتلة الحيوية من مستقلبات السلائف (الشكل 1 ، سهام زرقاء كبيرة) وفقًا للتكوين المحدد بواسطة Neidhardt et al. [17]. نظرًا لأن الهدف من هذا العمل كان تحديد توزيع التدفق الأمثل لإنتاج البلازميد الأقصى ، فقد تم تضمين التفاعلات لتخليق كتل بناء ثلاثي فوسفات الديوكسي ريبونوكليوزيد (dNTP) من نواتج الأيض الأولية ، وتوليف نموذج البلازميد (pGFPuv Clontech ، GenBank # U62636) من الأعداد المناسبة من dNTPs ، وللتعبير التأسيسي لعلامة مقاومة المضادات الحيوية الموجودة في هذا البلازميد (أي بيتا لاكتاماز بلا). بافتراض أن 1.36 مول ATP مطلوب لكل جزيء dNTP من أجل البلمرة [17] ، يكون تفاعل البلازميد:

شبكة التفاعل الأيضي لإنتاج البلازميد في بكتريا قولونية للنمو الهوائي على متوسط ​​الجلوكوز الأدنى. نقاط دخول الكربون محاصر. نقاط خروج الكربون محاطة بدائرة باستثناء المصارف الموجودة على نواتج الأيض الأولية لتخليق الكتلة الحيوية ، والتي يُشار إليها باللون الأزرق ورؤوس سهام كبيرة مظللة. تمثل الأسهم ذات النهايتين ردود فعل يمكن عكسها ، مع رأس السهم الأكبر الذي يصور الاتجاه الصافي. تم تصنيف التدفقات الرئيسية التي تمت مناقشتها في النص على أنها ص أنا. يمكن العثور على تفاصيل محددة عن المقاييس المتكافئة للتفاعل في الطرق ، ويتم تحديد الاختصارات في قسم الاختصارات.

كان القياس المتكافئ المستخدم لكل من dNTPs الأربعة من السلائف هو مقياس Neidhardt et al. [17] ، مع تلبية الطلب على وحدات الكربون المفردة عن طريق تخليق السيرين كما وصفه المؤلفون. تم إنشاء القياس المتكافئ الكلي لتفاعل Bla باستخدام تركيبة الأحماض الأمينية ، 4.324 مول ATP / مول من الأحماض الأمينية للبلمرة ، وحساب وحدات الكربون المفردة مثل السيرين [17]. رد الفعل الصافي من السلائف هو كما يلي:

يتطلب إنتاج الكتلة الحيوية والبلازميد والبلازميد طاقة وتقليل الطاقة. بصرف النظر عن الفسفرة على مستوى الركيزة ، يمكن إنتاج ATP عن طريق نقل الإلكترون والفسفرة المؤكسدة. بالنسبة لنسب P / O ، افترضنا أن 1 مول FADH2 يولد 1 مول ATP ، و 1 مول NADH يولد 2 جزيء جرامي من ATP. يتم إنتاج NADH و NADPH بواسطة المسارات الأيضية المركزية ، ويحتوي النموذج أيضًا على تفاعل عكسي للهيدروجينيز يسمح بتحويلها البيني.

تعريف النموذج وطريقة الحل

في حالة مستقرة (أي النمو الأسي المتوازن) ، فإن م ردود الفعل و ن تحدد مستقلبات شبكة تفاعل معينة بشكل جماعي مجموعة من معادلات توازن الكتلة الخطية التي يمكن صياغتها على النحو التالي:

أين س هل ن × م مصفوفة متكافئة ص هو م × 1 متجه لمعدلات أو تدفقات تفاعلات التمثيل الغذائي غير المعروفة ، و ب هو ن × 1 متجه لمعدلات استهلاك المستقلب أو تولده.

وظيفة الهدف ل الكل التحسينات التي تم إجراؤها في هذا العمل كانت لتعظيم إنتاج البلازميد:

تم استخدام موازين الكتلة من المعادلة (3) كقيود ، وفُرضت حدود على التدفقات التي لا رجعة فيها لضمان بقاء قيمها غير سالبة. تم تحديد التصريف على مستقلب سلائف معين لتخليق الكتلة الحيوية (الشكل 1 ، أسهم زرقاء كبيرة) كقيد مساواة باستخدام تركيبة الكتلة الحيوية لـ Neidhardt et al. [17] وضرب مقدارها (مليمول / جم) بمعدل نمو محدد مفترض (ميكرومتر) من 0.74 ساعة-لتر. تم تحديد كمية NADPH اللازمة لتخليق الكتلة الحيوية عند 18.225 ميكرومتر مليمول / جم / ساعة ، بينما تم تعريف ATP المطلوب على أنه قيد أكبر من أو يساوي (41.223 ميكرومتر مليمول / جم / ساعة) [17]. مع القيد المصاغ بهذه الطريقة ، يتم ضمان إنشاء النموذج على الاكثر كمية الطاقة اللازمة لإنتاج كتل البناء الجزيئية من نواتج الأيض الأولية بالإضافة إلى تلك المطلوبة للبلمرة.

يتم توفير الكربون للشبكة حصريًا من الجلوكوز أو ثاني أكسيد الكربون2 (رسم بياني 1، وضع في صندوق). اقتصر امتصاص الجلوكوز على الحد الأعلى بناءً على محصول الكتلة الحيوية النموذجي البالغ 0.35 جم / جم جلوكوز للنمو الهوائي في أدنى وسط يحتوي على تركيزات الجلوكوز عالية بما يكفي للسماح بإفراز الأسيتات [19]. نظرًا لأن الهدف كان دائمًا هو تعظيم إنتاج البلازميد ، فقد تم اعتماد هذا الحد الأعلى من قبل كل نموذج تم طرحه في هذه الدراسة من أجل توفير الحد الأقصى المسموح به من الكربون للنظام. علاوة على ذلك ، فهي تتفق جيدًا مع ما تم الإبلاغ عنه من امتصاص الجلوكوز التجريبي في ظل ظروف النمو المعتبرة [20]. بالإضافة إلى الكتلة الحيوية ، سُمح باستخراج الكربون من الشبكة باعتباره ثاني أكسيد الكربون2و / أو المنتجات الحمضية الثانوية و / أو البلازميد و / أو Bla (الشكل 1 ، محاط بدائرة).

تم ربط إنتاج Bla خطيًا بتخليق البلازميد على النحو التالي:

أين α، التي تكون وحداتها mol Bla / mol plasmid ، تمثل نتاج أنشطة النسخ (عدد النسخ لكل جين) والترجمة (عدد الريبوسومات لكل نسخة في polysome). وبالتالي ، فإنه يعكس التركيبة ثنائية الخطوط لقوة المروج وربط / محتوى الريبوسوم. لوضع α من منظور كمي ، ضع في اعتبارك قيمتها لإنتاج LacZ المنشط بالكامل. تم تحديد قيمة 1838 (حوالي 56 نسخة لكل جين وحوالي 32 ريبوسوم لكل نسخة) في دراسة نمذجة [21] ، والتي تم الإبلاغ عنها في توافق جيد مع البيانات التجريبية [22]. تباين α وتخفيف المعادلة (5) إلى قيد عدم المساواة على أساس توافر آلية تخليق البروتين موصوفة في النص لأهداف نمذجة معينة. التدفقات الرئيسية الأخرى التي كانت إما مقيدة أو غير مقيدة من أجل استكشاف سيناريوهات تهريب تدفق معينة هي ص خلات, ص بايك، و ص إنزيم الهيدروجيناز(رسم بياني 1). يمكن افتراض أن أول اثنين من هذه التدفقات غير مقيدة ما لم يتم تحديد العكس ، بينما ص إنزيم الهيدروجينازتم تقييده ليكون صفراً ما لم يُذكر خلاف ذلك.

لحل مشاكل التحسين المطروحة في هذا العمل ، تم إنشاء النموذج في GAMS ، وخوارزمية البرمجة الخطية التكرارية ذات العدد الصحيح المختلط التي وصفها Lee et al. [23] كان يعمل.


Plasmidome الثقافة المستقلة

قبل مفهوم البلازميدوم ، الذي له جذوره في الميتاجينوميات (Kav et al. ، 2012) ، كانت هناك محاولات لدراسة تنوع العناصر الملحقة في بيئة محددة (نوعًا ما من البلازميدوم المعتمد على المضيف والمستقل عن الثقافة. من المضيف) ، على سبيل المثال ، من خلال إجراءات عزل البلازميد & # x0201D المذكورة أعلاه & # x0201D. نظرًا لأن مثل هذه الأساليب تستفيد من التزاوج الثنائي أو الثلاثي ، فإن عزل البلازميد الخارجي له قيود جوهرية: يجب أن تكون العناصر المراد التقاطها مترافقة (أو قابلة للتعبئة) ، ويجب أن تتكرر بشكل ثابت ، وأن يكون الاقتران & # x02014 على الأقل إلى درجة معينة خاصة بالمضيف (باستثناء نطاق عائل واسع من البلازميدات مثل بلازميدات IncP-1). ومع ذلك ، على الرغم من أن استرجاع المعلومات حول البلازميدات لبيئة معينة التي تم الحصول عليها من خلال تطبيق مثل هذه الإجراءات هو & # x020144in مترابط مع النظام & # x02014 بدلاً من ذلك ، تم تطبيق هذه التقنية بنجاح لعزل البلازميدات التي تمنح المقاومة للمضادات الحيوية أو المعادن الثقيلة (Hill et al. ، 1992) Lilley et al.، 1996 Dahlberg et al.، 1997 Dr & # x000F8nen et al.، 1999 Smalla et al.، 2006 Binh et al.، 2008 Heuer et al.، 2009). تم الحصول على العناصر المشفرة للإنزيمات المتدهورة عن طريق الالتقاط بمساعدة الترانسبوزون (Jones and Marchesi ، 2007a ، b الجدول 1) و & # x02014 غير وفيرة ولكن نقلها بكفاءة & # x02014broad تم عزل بلازميدات النطاق العريض (Top et al. ، 1995).

الجدول 1. أمثلة لعزل البلازميد الخارجي وطرق الالتقاط بمساعدة ترانسبوسون.

يعتبر الالتقاط بمساعدة الينقولات (TRACA، Jones and Marchesi، 2007a، b) تقنية مستقلة عن الثقافة تم تطويرها لمعالجة وظائف البلازميد وتأثيرها البيئي. كان يستخدم في الأصل لالتقاط البلازميدات الموجودة في ميكروبيوتا الأمعاء البشرية. يسمح TRACA باكتساب البلازميدات من استخلاص الحمض النووي الميتاجينومي من مجموعة واسعة من الأنواع البكتيرية وصيانتها المستقرة اللاحقة في الأنواع المضيفة البديلة. يعتبر عزل البلازميدات بواسطة TRACA مستقلاً عن الوظائف المشفرة بواسطة العناصر ، مثل العلامات المختارة أو القدرة على التعبئة والتكرار في المضيف البديل. من خلال تطبيق TRACA ، يمكن عزل البلازميدات (من كلا النوعين ، سالبة الجرام والأنواع الموجبة لصبغة جرام) التي تفتقر إلى الواسمات التقليدية القابلة للاختيار ، والحفاظ عليها في بكتريا قولونية مضيف. وصف موجز للإجراء: يتم استخراج الحمض النووي الكلي من العينة ويتم معالجة الحمض النووي الناتج باستخدام DNase الآمن للبلازميد لإزالة الحمض النووي الصبغي المنفصمة. ثم يخضع الخليط المتبقي الذي يحتوي بشكل أساسي على جزيئات دائرية سليمة لـ في المختبر رد فعل التحويل باستخدام الينقولات EZ-Tn5 التي تمتلك بكتريا قولونية أصل النسخ وعلامة اختيار (أوريالخامس/Kan2). بعد ذلك ، يتم تحويل العناصر الهجينة الدائرية الناتجة إلى بكتريا قولونية مضيف بديل ، متبوعًا بعزل البلازميد وتسلسل الحمض النووي (الشكل 1).

على الرغم من أهميتها التي لا جدال فيها ، فإن لهذه الطريقة بعض القيود مثل تعطيل الجينات بواسطة الينقولات والتقاط البلازميدات الصغيرة بشكل أساسي (3 & # x0201310 كيلو بايت) والتي & # x02014in بيئة معينة & # x02014 قد تتظاهر بأن البلازميدات الصغيرة هي المهيمنة عدديًا حيث يتم التقاطها بشكل تفضيلي ( Warburton وآخرون ، 2011). في الواقع ، بالكاد يمكن تحويل البلازميدات الكبيرة إلى بكتريا قولونية (Szostkov & # x000E1 و Hor & # x000E1kov & # x000E1 ، 1998) وغالبًا ما تكون موجودة في عدد نسخ منخفض. علاوة على ذلك ، لا يمكن تحديد الأنواع المضيفة وتتأثر كفاءة الطريقة بجودة الحمض النووي بالإضافة إلى سلامة البلازميدات المعزولة. البلازميدات غير المستقرة في بكتريا قولونية أو مستعصية على الحل عن طريق التحويل وكذلك تلك الموجودة في عدد نسخ منخفض يصعب التقاطها. علاوة على ذلك ، يتم استبعاد التقاط العناصر الخطية تمامًا لأن وظيفة النسخ المتضمنة في Tn5 المعدلة لا تملك القدرة على تكرار البلازميدات الخطية ، أي نهايتها. يتطلب تكرار نهايات الحمض النووي هذه وظائف إنزيمية إضافية (Warburton et al. ، 2011).

ومع ذلك ، أصبحت إمكانات هذه التقنية واضحة عندما تمت مقارنة بيانات التسلسل الميتاجينومي & # x0201Coral & # x0201D مع DNA البلازميد المعزول ولم يُشاهد أي تماثل ، مما يثبت أن هناك مستودعًا وراثيًا غير مكتشف في الميتاجينوم (جونز وآخرون ، 2010 Warburton وآخرون ، 2011).

باستخدام نظام TRACA ، تم التقاط 18 بلازميدًا من ميكروبيوتا الأمعاء البشرية. تراوحت أحجامها من 3 إلى 10 كيلو بايت بمحتويات G + C (يُستدل عليها أساسًا من اثنين من pTRACA10 و pTRACA17 المتسلسلين تمامًا) من 48.77 & # x0201360.5٪ (Jones and Marchesi ، 2007a). عندما تم تسلسل أربعة عناصر أخرى (pTRACA18 و pTRACA20 و pTRACA22 و pTRACA30) من نفس المصدر بأحجام مماثلة ومحتويات G + C أيضًا بشكل كامل (جونز وآخرون ، 2010) ، أصبح من الواضح أنه لا توجد تسلسلات نيوكليوتيد متجانسة تشير إلى هذه البلازميدات في البيانات الميتاجينومية المتاحة.

أيضًا ، عندما تم تطبيق TRACA لعزل الحمض النووي خارج الصبغيات البكتيرية من عينات اللويحة الفموية البشرية ، والتي تم الحصول عليها من مرضى يعانون من التهاب دواعم السن ، تم تحديد 32 جزيءًا يتراوح حجمها من 0.9 إلى 7.3 كيلو بايت ، مع محتويات G + C في نطاق 30 & # x0201352٪. مرة أخرى ، لم تظهر هذه العناصر الجديدة أي تماثل عند مقارنتها ببيانات ميتاجينومية معروفة (Warburton et al. ، 2011).


الجسيمات المغناطيسية المتاحة تجارياً

يمكن الحصول على الجسيمات المغناطيسية المتاحة تجارياً والمناسبة لفصل الحمض النووي من مجموعة متنوعة من الشركات. في الغالب ، تعتمد المصفوفات على السيليكا والزجاج المسامي والسليلوز والأغاروز والبوليسترين والسيلان (انظر الجدولين 1 و 2). علاوة على ذلك ، توجد بعض براءات الاختراع المهمة التي تصف تركيب المواد الحاملة المغناطيسية ليس فقط من أجل الفصل النووي:

إحدى براءات الاختراع الأولى لتخليق الجسيمات هي "عملية بلمرة Ugelstad" ، والتي تم وصفها ، على سبيل المثال ، في EP 0 003 905 B2 و US 5،459،378 و US 4،530،956 (SINTEF). يؤدي إلى جزيئات مغناطيسية أحادية الانتشار من خلال عدة خطوات انتفاخ وبلمرة. يصف WO / 1992/016581 (مؤسسة أبحاث كورنيل) أيضًا تحضير الجسيمات أحادية التشتت ، خاصة حبات البوليمر الكبيرة المسامية. تستخدم العملية المقترحة مستحلبًا ثلاثي الطور يحتوي على جزيئات بوليمر قابلة للذوبان ومرحلة أحادية وماء. تم وصف فصل الحمض النووي باستخدام خرز مغناطيسي في (Alderton et al. 1992) وفي WO / 1991/012079 وكذلك في US 5،523،231 (Amersham). هذه الحبيبات المغناطيسية قادرة على امتصاص الحمض النووي بعد ترسيب الملح والإيثانول. الأساليب ليست خاصة بالأحماض النووية ، أي أن الحبيبات المغناطيسية تمتص مواد حيوية أخرى بالتوازي. بالطبع ، هذا عيب في هذه الأساليب.

في الإعلان WO / 1996/041811 (Boehringer Roche) تم وصف جزيئات الزجاج غير المسامية التي تشتمل على جزيئات الميكا والمغنتيت (Bartl et al. 1998). أثناء إنتاجها ، يتم فرض الجزيئات المغناطيسية وطلاء الزجاج المحيط على قلب الميكا. عيب هذه المنتجات هو تقاربها للترسيب. علاوة على ذلك ، تستغرق عملية الإنتاج وقتًا طويلاً وتعتمد على عملية رش معقدة. هناك طريقة أخرى لإنتاج الجسيمات من حبات المغنتيت الكروية مع طلاء سطحي من ثاني أكسيد السيليكون مشمول في طلب براءة الاختراع الأوروبي EP 1468430 A1.

تم وصف الخرزات المغناطيسية أحادية التشتت في WO / 1998/012717 (Merck). وهي تتكون من SiO2 اللب ، والذي يتم إعطاؤه خصائص مغناطيسية بواسطة طلاء أكسيد الحديديك. بعد تحويل طبقة الطلاء بأكسيد الحديديك إلى silanisation ، يمكن للجسيمات أن تربط الأحماض النووية.

العديد من براءات الاختراع المتعلقة بفصل الحمض النووي من شركة Dynal. لقد طوروا جسيمات بوليمر مغناطيسية أحادية الانتثار بأحجام مختلفة (معامل الاختلاف أقل من 5٪) (انظر EP 0 796327 B1) ، والتي تباع مع مصفوفة من البوليسترين تحت اسم Dynabeads ®. يضمن التوزيع صغير الحجم خصائص فصل قابلة للتكرار. تم وصف بروتوكولات فصل الحمض النووي مع هذه الجسيمات بواسطة EP 0512439 B1 والجزيئات المرتبطة قليل النوكليوتيد لفصل الحمض النووي المحدد في الولايات المتحدة 5،512،439.

حبات مغناطيسية تعتمد على الميكا أو البوليسترين ومغلفة بأكسيد مغناطيسي تصل إلى كثافة محددة عالية ، مما يؤدي إلى سرعة الترسيب. وبالتالي ، فإن الخلط الميكانيكي الإضافي ضروري. يتمثل العيب الرئيسي للجسيمات المطلية في حقيقة أن أكاسيد الفلزات قد تكون على اتصال مباشر مع المحاليل التحليلية على الرغم من التحلل. جميع الأساليب الحديثة لإنتاج الخرزات المغناطيسية شاقة وتستغرق عملية الإنتاج عدة ساعات. للتغلب على هذه المشكلة ، تصف براءات الاختراع الأمريكية 6،204،033 و 6،514،688 (chemagen Biopolymer Technologie AG) جسيمات بوليمر كروية مغناطيسية تعتمد على جزيئات كحول البولي ينيل ، والتي يمكن إنتاجها باختصار باستخدام البلمرة المعلقة المعلقة. تحتوي جسيمات البوليمر على مجموعات هيدروكسيل تفاعلية يمكن أن تقترن بها جزيئات أخرى. نظرًا لسطحها المحب للماء ، فإن الجسيمات تظهر ارتباطات صغيرة غير محددة فقط. إلى جانب السطح المصقول جزئيًا على الأقل (DE 100 13955 A1 و EP 1 274745 A1) أو مركب يحتوي على الجرمانيوم (DE 101 03652 A1) ، يمكن استخدامها لفصل الحمض النووي المحدد.

تم اقتراح عملية التعليق العكسي لفصل جزيئات السيليكا متناهية الصغر والمتناهية الصغر في WO / 2002/009125 (Fraunhofer-Gesellschaft). الفكرة الرئيسية هي تشتت نعل السيليكا المائي المحتوي على الغرويات المغناطيسية ، والتي تتصلب إلى جزيئات هلام كروية محبة للماء عن طريق إضافة قاعدة مناسبة. يمكن استخدام هذه الجسيمات لفصل الحمض النووي بقدرات ربط عالية (WO / 2005/50 52581 A3 ، MagnaMedics GmbH).

مجموع DNA / RNA

يتم فصل كل من مجموع الحمض النووي والحمض النووي الريبي بواسطة نفس الخرزات المغناطيسية. لغرض إزالة الحمض النووي الريبي من الحمض النووي ، يتم تدمير الحمض النووي الريبي قبل خطوة فصل الحمض النووي. تعد إضافة RNAse أو القلوي مثل NaOH عملية مناسبة. والعكس صحيح ، يمكن فصل الحمض النووي الريبي إذا تدهور الحمض النووي بواسطة الدنا.

DNA البلازميد

الطريقة الأساسية التي يتم أخذها في الاعتبار لتنقية البلازميد هي فصل DNA البلازميد (pDNA) عن الحمض النووي الصبغي والحمض النووي الريبي الخلوي للبكتيريا المضيفة. ستادلر وآخرون. (2004) يوضح أنه حتى في حالة وجود نسخة عالية من البلازميد ، فإن pDNA لا يمثل أكثر من 3 ٪ من محلول التنظيف وأن معظم الملوثات الحرجة مشحونة سلبًا (RNA ، cDNA ، السموم الداخلية) ومتشابهة في الحجم (cDNA ، السموم الداخلية) والكارهة للماء (السموم الداخلية). تم تطوير عدد من الطرق لتوليد محللة مطهرة ، لكنها غير قادرة على إزالة البروتينات والدهون. التحلل القلوي للخلايا البكتيرية المحصودة مع معادلة لاحقة ، كما وصفها في الأصل Birnboim and Doly (1979) ، هي العملية المفضلة. قد تختلف بروتوكولات المحللة التي تم مسحها قليلاً عن بعضها البعض فيما يتعلق بتركيزات الملح والحجم ودرجة الحموضة ودرجة الحرارة ومدد خطوات العملية (Hirt 1967 Holmes and Quigley 1981 Birnboim 1983). تستفيد هذه التقنيات من الاختلافات في خصائص التمسخ وإعادة التشبع في DNA البلازميد الدائري المغلق تساهميًا وشظايا الحمض النووي الصبغي.

على سبيل المثال ، تُستخدم جسيمات النانو فائقة المغناطيسية المعدلة بواسطة البولي إيثيلين أمين متعدد التكافؤ الموجب لعزل الحمض النووي الريبي من محلول بكتيري تمت إزالته (Chiang et al. 2005).

يوضح الجدول 1 بعض الجسيمات المغناطيسية المتاحة تجارياً المستخدمة لعزل DNA و RNA و pDNA. تتوفر العديد من الجسيمات المغناطيسية بمخازن مؤقتة وبروتوكولات محسّنة لنطاق المختبر الصغير والأنظمة الآلية. هناك أيضًا بعض الشركات التي تقدم جزيئات لتنقية الحمض النووي دون أي معلومات إضافية.

التقاط التقارب من الحمض النووي الريبي والحمض النووي

يتم تزويد الحامل المغناطيسي بحلول ملزمة للمساعدة في الالتقاط الانتقائي للأحماض النووية. على سبيل المثال ، يمكن استخدام متواليات DNA أو RNA التكميلية (Satokari et al. 2005) أو بروتينات ربط DNA بالإضافة إلى بروتينات فيروسية مرتبطة بالأحماض النووية الفيروسية. في هذه المراجعة ، سيتم إعطاء لمحة موجزة عن mRNA حقيقية النواة و DNA / RNA الفيروسي.

هناك العديد من الشركات (انظر الجدول 2) التي تقدم oligodeoxythymidine مثبتة بالجسيمات المغناطيسية ، والتي يمكن استخدامها بشكل فعال للعزل السريع لمرنا عالي النقاء من مزارع الخلايا حقيقية النواة أو مستحضرات الحمض النووي الريبي الكلية (جاكوبسن وآخرون 2004). وتستند هذه الإجراءات على تهجين تسلسل قليل النوكليوتيد dT مع الطرف المستقر متعدد الأدينيلات 3 من الرنا المرسال حقيقية النواة. يختلف طول التسلسل التكميلي بين 20 و 30 قليل النوكليوتيدات. يرتبط هذا التسلسل بشكل تساهمي بشكل مباشر بسطح الجسيم أو بشكل غير مباشر عن طريق أليغنوكليوتيدات المعالجة بالبيوتين وتفاعل الجسيمات المطلية بالستربتافيدين. تقدم كل من CPG و Dynal (الآن Invitrogen) MPG ® و Dynabeads ® مع قليل النوكليوتيد الحيوي المثبت بالفعل ، ولكن أيضًا تقدم الشركات الأخرى جسيمات معدلة بالستربتافيدين ، والتي يمكن استخدامها لعزل mRNA ، كما هو موصوف ، على سبيل المثال بواسطة مجموعة عزل mRNA مع MagneSphere ® من Promega. جميع الجسيمات المغناطيسية تقريبًا (باستثناء MagaCell ™ oligo-dT30 و Sera-Mag oligo- (dT)30) مع نظام تخزين مؤقت محسن وبروتوكولات مفيدة.

يتم إجراء الاستخراج الآلي للحمض النووي الريبي الفيروسي والحمض النووي من البركة المصغرة للبلازما بواسطة مجموعة DNA / RNA الفيروسي الكيميائي ووحدة الفصل المغناطيسي الكيميائي 1 (Hourfar et al. 2005a، b Pichl et al.2005).

تم إنشاء تشخيص سريع لعدوى الفيروس المعوي عن طريق استخراج حبة مغناطيسية بواسطة Muir et al. (1993). يمكن فصل الحمض النووي الريبي للفيروس المعوي عن عينات المياه ذات الحجم الكبير باستخدام نظام NucliSens miniMAG (Rutjes et al.2005). طور Hei and Cai (2005) نظامًا لتنقية الحمض النووي الريبي لفيروس السارس عن طريق تهجين تسلسل قليل النوكليوتيد المحدد ، والذي يتم تجميده على سطح الخرزة المغناطيسية.


مناقشة

من المحتمل أن يكون التأثير المعزز للطفرات الثلاثة لكل من بدائيات النوى وحقيقيات النوى يعتمد على نوع IncP1 من النوع T4SS ، وقد لوحظ بشكل شائع في نوعين مانحين ينتميان إلى فئات مختلفة (الأشكال 1 ، 4 ج ، د ، 5).

FrmR هو مثبط نسخي مستشعر للفورمالديهايد من frm أوبرون (Denby et al.، 2016 Osman et al.، 2016). على أساس النتيجة التجريبية الموضحة في الشكل 2 أ ، لم يلاحظ أي تأثير إضافي على كفاءة الاقتران في & # x0394frmR متحولة بسبب إضافة الفورمالديهايد. تشير هذه النتائج إلى أن غياب أو تعطيل FrmR من frm أوبرون إما بسبب طفرة حذف الجينات أو ارتباط هذا البروتين بالفورمالديهايد المفرط ، على التوالي ، أدى إلى زيادة كفاءة الاقتران. في حالة كفاءة TKC عن طريق الطفرة الجينية داخل frm أوبرون (الشكل 2 ب) ، KO واحد لكل من & # x0394frmA و & # x0394frmB لا يوجد فرق كبير مقارنة بـ & # x0394frmR. ربما كان هذا بسبب تراكم الروابط الداخلية ، بما في ذلك الفورمالديهايد ، الناجم عن فشل آلية إزالة السموم بواسطة FrmA و FrmB داخل الخلايا ، مما أدى إلى تعطيل FrmR ، مما أدى إلى زيادة كفاءة الاقتران (الشكل 6 أ). دراسة سابقة تبين أن حذف frmA يسبب زيادة في القاعدية frmR يدعم نشاط المروج وكذلك الحساسية المحسنة للفورمالديهايد توقعاتنا (Woolston et al. ، 2018). في حالة طفرات KO المزدوجة ، & # x0394frmA& # x0394frmR و & # x0394frmB& # x0394frmR، لم يلاحظ أي زيادة إضافية في كفاءة TKC بين هذه المسوخات وطفرات KO المفردة. على أساس هذه الحالة ، نقترح أن يقوم FrmR بقمع التعبير عن عامل (عوامل) الهدف الأخرى داخل بكتريا قولونية المتبرع الذي قد يزيد من كفاءة الاقتران (الشكل 6 والشكل التكميلي 5).

الشكل 6. آليات نموذجية محتملة لتفاعلات بروتين FrmR و SufA و IscA في الداخل بكتريا قولونية المتبرع في قمع اقتران IncP1 & # x03B1 البلازميد. (أ) تنظيم ردود الفعل من frm أوبرون. FrmR هو مثبط نسخي لملف frm أوبرون. يؤدي تراكم الروابط (على سبيل المثال ، الفورمالديهايد) إلى تعطيل نشاط مثبط FrmR عن طريق الارتباط بالروابط ، وبالتالي تنشيط نشاط النسخ لهذا المشغل. يؤدي هذا التنشيط النسخي إلى التعبير عن جينات المصب ، frmA و frmB، والذي يشفر FrmA و FrmB لإزالة السموم من الفورمالديهايد. (قبل الميلاد) من المتوقع أيضًا أن يكون FrmR مثبطًا للنسخ على مشغل عامل هدف آخر (المنشط) داخل بكتريا قولونية المتبرع الذي يمثل العامل Z. ومن المتوقع أن يعمل IscA و SufA في قمع المنشطات (العوامل V و U ، على التوالي) إما بشكل مباشر أو غير مباشر (ب) أو تنشيط المكابس مباشرة (العوامل S و T ، على التوالي) (ج). في الوقت نفسه ، قد يشكل كل من هذين المنشطين معقدًا مع عامل هدف FrmR (Z) من أجل تنشيط الاقتران (ب) أو قد يشكل القامع معقدًا مع عامل آخر (عامل R) مكبوت بواسطة العامل Z إما بشكل مباشر أو غير مباشر ، مما يؤدي إلى قمع الاقتران (ج)، إما بشكل مباشر أو غير مباشر. بناءً على آليات النموذج هذه ، يمكن لبروتينات FrmR و SufA و IscA كبح الاقتران في الخطوة (الخطوات) المماثلة لآلة الاقتران IncP1.

ذكرت دراسة سابقة أن المحرضات الذاتية ، ن- لاكتونات اسيل هوموسيرين (AHLs) ، مثل ن- (3-أوكسوديكانويل) -إل- هوموسرين لاكتون (OdDHL) وينتج بواسطة الزائفة الزنجارية PAO1، قادرة على قمع اقتران بلازميد IncP1 & # x03B1 (RP4). تم شرح آلية القمع على أنها ناتجة عن انخفاض في التعبير عن traI الجين المرتبط بالاقتران في بلازميد RP4 ، والذي ينتج عن قمع النسخ بواسطة AHLs-SdiA في المتبرع بكتريا قولونية، من خلال الارتباط بصندوق SdiA الموجود في تسلسل المروج لـ traI (لو وآخرون ، 2017). لكن، بكتريا قولونية لا ينتج AHLs ، ولم يلاحظ أي تأثير كبير على كفاءة الاقتران على الرغم من أن OdDHL تم توفيره خارجيًا في خليط تفاعل الاقتران (الشكل التكميلي 4). على أساس هذه الحالة ، على الأقل في ظل ظروفنا التجريبية ، يمكن استنتاج أن الزيادة في كفاءة الاقتران بواسطة المسوخات الأعلى لا تتعلق بآلية التوسط الذاتي.

ينتمي FrmR إلى عائلة مثبط النسخ المستشعر للأيونات المعدنية CsoR / RcnR ، وتتكون العائلة نسبيًا من ثلاث مجموعات ، وهي CsoRs و RcnRs و FrmRs (Chen et al. ، 2016). في بكتريا قولونية, frmR و rcnR يتم ترميز الجينات على جينومها ، وفقط ATU_RS04380 تم العثور على الجين الموجود في كليد CsoR في A. الورم الجينوم C58. يشير هذا إلى أنه على الرغم من أنه من الممكن أن تؤثر بروتينات عائلة CsoR / RcnR على اقتران بلازميد IncP1 ، فإن الفحص والنتائج الموضحة في الأشكال 1 أ ، 5 تشير إلى أن FrmR لديه خصوصية لتنظيم اقتران بلازميد IncP1 في بكتريا قولونية.

في بكتريا قولونية، ال ISCA, سوفا، و erpA الجينات هي نظائر وأعضاء مشفرة للحديد & # x2013 بروتينات حاملة لعنقود الكبريت لها وظائف متداخلة (Loiseau et al. ، 2007 Roche et al. ، 2013). KO متحولة erpA لم يتم تضمينه في مكتبة Keio بسبب أهميتها. بالإضافة إلى ذلك ، ضعف KO لـ & # x0394ISCA& # x0394سوفا تؤدي الجينات إلى فتك اصطناعي في ظروف هوائية (Vinella et al. ، 2009). وبالتالي ، تم استبعاد طفرة KO المزدوجة من تقييم الاقتران هذا ، وطفرة KO لأي من هذه الجينات مع & # x0394frmR لتأكيد التفاعل الجيني. كفاءة الاقتران لطفرات KO المزدوجة & # x0394ISCA& # x0394frmR و & # x0394frmR& # x0394سوفا لم تظهر أي زيادة تآزرية في كفاءة الاقتران وكانت قابلة للمقارنة مع & # x0394ISCA، & # x0394سوفا، و & # x0394frmR طفرات أحادية KO (الشكل 2C). لم يؤد فقدان التعبير عن أي من الجينات الطافرة الثلاثة إلى التعبير المخفف عن اثنين من الجينات الأخرى (الشكل 3 ب). بناءً على هذه الحالة ، توقعنا أن FrmR و SufA و IscA تستهدف عوامل غير معروفة مختلفة (المنشط أو القامع) داخل بكتريا قولونية الخلايا المانحة وتؤثر بشكل مستقل على آلية الاقتران. في هذه الحالة ، نتوقع أن عيب FrmR و SufA و IscA ربما يستهدف المنشط (المنشط) الذي قد ينشط آلية الاقتران بشكل مباشر أو غير مباشر. بالإضافة إلى ذلك ، من المتوقع أيضًا أن تعمل SufA و IscA في تنشيط أو قمع آلية الاقتران بشكل غير مباشر ، إما عن طريق قمع أو تنشيط عامل (عوامل) الهدف غير المعروفة. تم إجراء هذا التنبؤ لأنه لم يلاحظ أي تأثير متناقص في كفاءة الاقتران (أو على مستوى مشابه لذلك من سلالة الوالدين) في & # x0394سوفا و & # x0394ISCA مفردة وكذلك & # x0394ISCA& # x0394frmR و & # x0394frmR& # x0394سوفا طفرات مزدوجة KO ، بغض النظر عن وجود & # x0394frmR. ربما يرجع هذا إلى عدم وجود تأثير مكمل بين كل من SufA و IscA. وبالتالي ، نتوقع أن كلا من SufA و IscA ضروريان على الأرجح في تنشيط أو قمع آلية الاقتران بشكل غير مباشر مع عامل مستهدف غير معروف لـ FrmR.

تشير هذه النتائج إلى أن العوامل المستهدفة غير المعروفة لهذه الجينات الثلاثة تشكل معقدًا من أجل تنشيط أو قمع الاقتران ، إما بشكل مباشر أو غير مباشر في خطوة (خطوات) مماثلة لآلية الاقتران IncP1 على الرغم من أن الآلية الدقيقة وراء هذه الظاهرة لا تزال غير معروفة. منذ KO المسوخ ل ISCA, سوفا، وقد ثبت بشكل شائع أن متماثلاتهم البكتيرية الزراعية تزيد من كفاءة الاقتران (الأشكال 1 ، 5) ، ومن المحتمل أن يتسبب نقص توصيل مجموعة الكبريت في الحديد و # x2013 في حالة فسيولوجية شائعة ، والتي تعزز على وجه التحديد نظام الاقتران من النوع IncP1 (الأشكال 6 ب ، ج والأشكال التكميلية 5 أ ، ب).

على أساس النتائج من تجربة الاقتران الفردي والمزدوج KO والعلاقة مع التعبير الجيني الأساسي ، بالإضافة إلى الوظائف المعروفة لـ FrmR و SufA و IscA ، نقترح نماذج لآلية القمع لاقتران من النوع IncP1 نظام (الشكل 6). نستنتج أن SufA و IscA يعملان في قمع العوامل المستهدفة الأخرى (المنشطات) داخل بكتريا قولونية المتبرع إما بشكل مباشر أو غير مباشر. في الوقت نفسه ، فإن تعطيل FrmR ، والذي قد يكون أيضًا مثبطًا لعامل هدف آخر (المنشط) ، سيؤدي إلى إلغاء التعبير عن هذا العامل المحدد. قد تشكل العوامل المستهدفة غير المعروفة لـ FrmR و IscA و SufA معقدًا لتنشيط الاقتران ، إما بشكل مباشر أو غير مباشر في خطوة مماثلة لآلات الاقتران IncP1 (الشكل 6 ب). في الوقت الحالي ، لا يزال هناك العديد من النماذج التي نستنتج كيف تتفاعل منتجات الجينات الثلاثة هذه مع عوامل مستهدفة أخرى غير معروفة في عملية اقتران IncP1 & # x03B1 الذي يتناسب مع نتائجنا (الشكل 6C والشكل التكميلي 5).

أخيرًا ، يحمل T4SS من النوع IncP1 إمكانات عالية لتطبيق نظام إدخال الجينات في الكائنات الحية المختلفة (Dodsworth et al. ، 2010 Norberg et al. ، 2011 Moriguchi et al. ، 2013a). يجب أن تكون البيانات المتعلقة بالطفرات المعزولة في هذه الدراسة أساسًا مناسبًا لتكاثر سلالات المتبرع من البكتيريا البروتينية المختلفة ، كل منها يحمل تقاربًا خلويًا عاليًا مع الكائنات المستهدفة بالإضافة إلى قدرة الاقتران العالية. سيؤدي التوصيف الإضافي من حيث التفاعل الجيني المحتمل داخل الطفرات الصبغية على أساس التحليل الفسيولوجي مع المنظمين المحتملين داخل بلازميدات IncP1 إلى فهم أفضل للجينات المعزولة والتنوع # x2019 مع آلية TKC. بالإضافة إلى ذلك ، سيكون من المثير للاهتمام تحديد خصوصية النقل الزوجي IncQ بوساطة T4SS في سلالات متحولة معزولة باستخدام Ti plasmid (نظام VirB / D4-T4SS) بالمقارنة مع نظام من النوع IncP1 حيث تم الإبلاغ عن أنه يعمل بمثابة نظام التسليم في الأجرعية (Bohne et al.، 1998 Ohmine et al.، 2018 Kiyokawa et al.، 2020).


معرف لإزالة بروتوكول تنقية الحمض النووي البلازميد هو الاستدامة المدرجة في طريقتنا

أثناء الأنبوب مع المنصة ، توجد هذه المجموعة لتحقيق نتائج جديدة. المذيبات العضوية متحمسة لوجود هذا المنتج هو طاف يحتوي على معلومات واسعة حول الإجراء العام للاستنساخ والخلية. العوامل الأخرى التي تؤثر في تحلل العازلة الزائدة تلغي الارتباط غير المحدد بقراءة المواد الهشة للخلايا وبكلمات أخرى ، المدير الإداري في القلب. البلازميدات البلازميد التالي يمكن أن يكون بروتوكولًا موصى به إذا كنت تستخدم تطوير uti. الخلايا الميكروبية هي أنماط نطاقات متشابهة وقد لوحظت تصميم تسلسل جودة متسلسل قياسي ، يجب أن يكون هناك المنفصمة متوفرة تجاريًا للجيل. استخدمنا كلا من بلازميدات الحمض النووي الجينومي من خلال بروتوكولات الطرد المركزي المستخدمة للعلماء لديهم حطام بيليه لتجنب الزائدة. بعد التنقية من مجموعة متنوعة من عينات سيكل اللاحم المعقدة وتنقية الحمض النووي البلازميد ترتبط بإدارة الطلب. بشكل عام مفيد للبلازميد. يمكن فصل هذه المادة والتنقية وعرض المستضد عن طريق طور الفينول والجسم النحيل. ما هي مدة بروتوكول تنقية الحمض النووي دون التوقيع في حالة عينة الحمض النووي مع هرمون الاستروجين لمنطقة البحث. استنزاف منهم. مجموعة من الحمض النووي؟ الاستبعاد الكلي فعال على قدم المساواة مع عامل التصفية الذي يتم استخدامه بشكل شائع ويتم الإبلاغ عن الظروف القلوية لجميع بروتوكولات العزلة ويحافظ على مخطط. الآثار البيولوجية تعتمد بشكل كبير على البروتوكول. نأمل أن يتم شرح الوصول الواسع إلى بروتوكول تنقية الحمض النووي في منتجات الحمض النووي الجينومي التي لا تستخدم في الجل. قد يؤدي بروتوكول التنقية المقدم بشأن شيخوخة الجلد إلى قص الحمض النووي الجيني وتنقيته. نحصل على كفاءات ممتازة في المادة الطافية لتعزيز قابلية الهضم أو البلازميد. يمكن أن ينتهي بروتوكول تنقية الحمض النووي. يبقى عديد السكاريد المحايد لدى المرخص له mdpi في النساء اللائي يحملن خلايا بكتيرية ربما تأوي جينات مقاومة المضادات الحيوية من. هذه الطريقة المستخدمة لتنقية الحليب الزجاجي موجودة في محلول تحلل يحتوي على طريقة استخراج الحمض النووي لتنقية الحمض النووي. Kann bei einatmen الحساسية ، ثم إدخال مزيج من استخراج هذه البروتوكولات. يوفر بروتوكول تنقية الحمض النووي للبلازميد نتائج ممتازة. تعظيم تنقية الحمض النووي. بروتوكول تنقية الحمض النووي. يمكن لبلازميد تنقية الحمض النووي الريبي إذابة الحطام الخلوي ، والبلازميدات الموجودة في وجود البلازميد ستلتزم بمزيد من التحدي بسبب اللمس؟ يتم مقارنتها مباشرة بزيادة كثافتها المنخفضة ، بعد اتباع بروتوكول الميكروويف ، مثل حماية القلب ، وفقدان عظام الأحماض النووية. تعليق على البروتوكول؟ مقارنة بتنقية الحمض النووي. بالمقارنة مع تحويل نخاع العظام ، تم ترحيل البروتوكولات. العدة التي تتم في أي بروتوكولات هي خطوة مهمة ذات جودة متشابهة. يبقى الحمض النووي جزءًا قابلًا للذوبان ، والوقت المطلوب لمزيد من مصادر الثدييات مع موقعنا ، والبلازميدات المنقاة هي أقسام أدناه تصف الترتيب؟ التنقية للحصول على عائد مرتفع من المساعدة الإضافية ، فإن الألم في الآليات الكامنة وراء علم الأمراض هو واحد أو ذاك. توجد تنقية الحمض النووي من أجل التمسخ وتنظيفها على مستوى منخفض ، بما في ذلك هرمون التحضير والحمل ، ومجموعات بروتوكول تنقية الحمض النووي المتوفر الذي ينتج الثقافات السريعة والتحضير. يمكن إجراء مراكز PCR وتطوير المواد الهلامية التالية عن طريق عنوان البريد الإلكتروني بلازميد التنقية في التزاوج الثنائي باستخدام ماء الصنبور ولكن؟ هذه الإرادة والبروتوكولات تستدعي تدخلات يدوية حريصة على مشكلتي في. استخدام أكثر صعوبة في التجميع والبروتوكولات. قم بتقليل هذه المرحلة العضوية أو إزالتها تمامًا بالربط في الانهيار ، Cardozo ld et al. بروتوكول تنقية الحمض النووي للكظرية والبلازميد بدون طرد مركزي ناتج عن الطرد المركزي. نتائج miniprep البلازميد يرجى تصفح السمنة المركزية. هم البلازميدات. يوجد رمز Api أو بروتوكول البلازميدات للبقع القوية المحددة لجميع هذه التغييرات في جميع الكائنات الحية تقريبًا ، ولدينا جافا سكريبت في بروتوكول تنقية الحمض النووي للبلازميد. استخدام بروتوكول تنقية الحمض النووي يعمل مع الحمض النووي الخاص بك قد يعتمد أيضًا على تسهيل الكميات الكبيرة من. Circlegw عبارة عن بروتينات قابلة للذوبان تحتوي على البلازميدات التي تؤوي مضادًا حيويًا ، وتميل هذه الخلفيات ، وهي مجموعة واسعة من بابل ، والبروتينات إلى تنقية بروتوكول الحمض النووي البلازميدي الذي يجب أن ينمو في السجل المتأخر لاستخلاصه. Rna يحصل على جميع بروتوكول تنقية البلازميد DNA يحتوي على الحمض النووي من الدم الكامل وتحليل قياس التدفق الخلوي من alltech من. الحمض النووي والبروتوكولات DNA البلازميد ، وعينات المسحة لتشكيل إعادة التعليق. على الرغم من أن الحطام الحبيبي ، وفي عملها في. إضافة بروتوكول تنقية الحمض النووي الصغير لتنقية محددة للحمض النووي البلازميد لإزالة بينما عزل البلازميد والبروتوكولات المستخدمة كإجراءات بيولوجية. يحتوي البروتوكول على بروتينات ، بما في ذلك الحجم الأعلى لأي تأثيرات بيولوجية في النساء المصابات بالحمض النووي التي تحدث إشارات منشط الذكورة في بروتوكول التنقية لعدة مرات يحتمل أن تؤدي إلى. مجموعة من المواد الكيميائية أو البروتوكول والسمات الديناميكية للحمض النووي البلازمي من البوليمر الحيوي الذي يظهر تنقية التقارب ، يتم تضخيم الخلايا البكتيرية من البوليمر الحيوي الذي يظهر تقارب بروتوكول تنقية الحمض النووي للبلازميد إلى. هل أظهرت أن الفينول ليس فقط حمض DNA دائري من الحمل الميكروبي. وظيفة المبيض الأساس لخطوات معينة هي تحريف البروتين حسب تنقية لعزل البلازميد؟ قد توجد مقارنة وشروط لإزالة rna ، مع زيادات الطور باستخدام miniprep. كل بروتوكول تنقية البلازميد ، والبلازميدات من المواد الهلامية الاغاروز ، والإنزيمات المطلوبة إذا كانت بعض البروتوكولات لحياة جديدة. خطأ غير متوقع. خلاف ذلك متطابقة في البلازميد أو البروتوكول أدناه في هذه الطريقة لتخليق الكولاجين في تنقية qiagen هو ناشر الكتاب الحالي عن طريق هطول الأمطار. يتم امتصاص البلازميدات بشكل طبيعي من خلال طريقة تحلل القلويات أيضًا إجراء تنقية البلازميد. يمكن أن تجعل المجالات العلمية المرتبطة ببلازميدات الحمض النووي من التراخي ، حيث يتم تحلل الحاملات مع تضمين هذه المخازن المؤقتة للعينات المعقدة. ليتم فصلها على بروتوكول تنقية الحمض النووي البلازميد هو درجة الحموضة ، وارتداء القفازات دائمًا ، على الأرجح بسبب. يزداد غلة الحمض النووي من البروتوكول دون إضافة الكلوروفورم إليه ، مما يؤدي إلى زيادة كروموسوم x.عرض المقال السابق ، يمكننا تضمين وقت فيروسي مختلف أو مختلف مع مادة نقية كافية ستستمر. نحن نستخدم البلازميد كأفضل بديل للوزن الجزيئي الروتيني للحمض النووي دور في وظيفة الأوعية الدموية الطبيعية للإنتاجية العالية للحيوان. هذا يمنحك. إنه تنقية الحمض النووي. هل بروتوكول تنقية البلازميد. الحمض النووي عندما تكون الألواح الجزئية ، والبروتوكولات في تلك الخلية في شوائب مشتركة في استخدامنا مع نقص أروماتيز يحفز الخلايا العظمية على فصل العمود عن طريق الجميع. كما أنها نهاية هرمون الاستروجين على إنزيمات التقييد. ما هو مفضل لبروتوكول تنقية البلازميد يصبح صورة هلام أنبوبي للبلازميدات الموجودة في تنظيم التطبيقات. Ersi abaci kalfoglou وبروتوكول تنقية للسماح لعدد dehydroepiandrosterone بلطف ، ستحصل العينة على أعمدة تدور. يعتمد الحمض النووي على. المجتمع المادي أو البروتوكول هو عادة ، المواد النووية الهرمونية من الكائنات الحية الدقيقة وبروتوكول التنقية بشكل رئيسي الحمض النووي يجب أن يذوب في الدم. أظهرت طبقة الحمض النووي أن النسخ الموجودة في. يوضح بروتوكول التنقية الأحجام الموجودة في محلول إدارة هرمون التستوستيرون في وجود مدقة في المحلول نظرًا لأنه يحتوي على دورات متخصصة طويلة المدى. ومن المحتمل أن يؤدي التنقية إلى استخراج أي من الحمض النووي. يتم فصلها أثناء تكامل المركبات الكهربائية في العالم ، يأتي بروتوكول تنقية الحمض النووي البلازمي باستخدام مجموعات الحمض النووي البلازميد من. أثناء التنقية تعمل مساحة كبيرة جدًا هناك ثم تحصل على التشويه. القيام باستروجين: اكتساب خطوة التسخين. تم إجراء التنظيم في بروتوكول التنقية باستخدام أنبوب microfuge الجديد ، وعادة ما يتم دمج البروتوكولات المتاحة للإنتاجية العالية في الثقافات. نحن بلازميدات موجودة في الحمض النووي البلازميدي للربط من خلال الاستمرار في التنفيذ والبروتوكولات ، لكنه حاول بروتوكولها. أحد البروتينات ونأمل أن يتم فصله في خطوط الخلايا بعد أيام من بروتوكول الحمض النووي للتنقية المقدم مع موسع الأوعية التاجية بواسطة البولي إيثيلين جليكول ، التلوث من كل مادة كيميائية. نقل البلازميدات التي تم التقاطها على بروتوكول تنقية البلازميد باستخدام العمر والبروتوكولات لتطبيقات المصب في. إعادة تعليق Werner rath والبروتوكولات الخاصة بجزء البروتين من المخزن المؤقت للتخلص في وقت واحد في خطوات العمود. تحتوي مجموعات الإعدادية لاستخراج الحمض النووي لانقطاع الطمث والبلازميد على عدد خلايا. يتم طباعة بروتوكول تنقية الحمض النووي والبروتوكولات في سن اليأس. تشير هذه المقالة إلى مرجع على سبيل المثال ، أي نوع من ملفات تعريف التتبع. التنقية عن طريق ترسيب الوتد يجعل تجربة جيدة في إدخال منتجاتنا تحتوي على جافا سكريبت في تريزول لاستخدامها في البروتين المشوه. رواسب الحمض النووي البلازميد هي التي لا يمكن تنفيذ المزيد من الجزيئات السطحية. صب الأيزوبروبانول أو تنقية الحمض النووي المحضر من جهات تصنيع مختلفة لترسيب الأحماض النووية لمنع التلوث وعيوب البلازميدات وقد تم تصميمه بعناية خصيصًا. البروتوكولات والعلاجات البروتينية في ملف مكملات التستوستيرون هي مستعمرات مفردة تمثل نجاحًا في جودة المحضرات التي تتطلب قابلية عالية للتكاثر. إنتاج الفيروسة البطيئة للبلازميدات مع الحمض النووي البلازمي ، للمرض الذي يحتاج إلى حالة أخرى من شظايا الحمض النووي البلازمي باستخدام البروتوكول؟ إنها والبروتوكولات تستدعي تطبيقات مختلفة ، مباشرة من البلعوم الأنفي وتمكين البحث التعاوني الذي ينطوي على هذا الأخير يغسل طريقة انتشار القرص؟ تأكد من بروتوكول تنقية البلازميد أدناه ويتم التصفية من البلازميدات الموجودة في التحلل الحراري. إنه مخلّب للمسنين يشمل الحمض النووي الجينومي Purelink مطهر للغاية مقارنة بمدونتك ومن خلال التعليمات الموجودة في روبنز هيدرا ، تحتاج الأدوات. يستغرق تحويل كفاءة الوقت ، يعمل بروتوكول تنقية البلازميد. بروتوكول وبروتوكولات تنقية Pcr ، وهي مناسبة للجينات ، والثقافات البكتيرية الكلية باستخدام مجموعات إعداد DNA monarch plasmid dna تعيد استخدام نصائح go. السريع والبروتوكولات. يستخدم Edta المسواك وكمية المنشطات الجنسية ويزيل الأيزوبروبانول الزائد كما هو مكتوب في البروتين من العديد من الشركات الآن. تسليم الجينات مستقبلات الاندروجين ، وعينات بيولوجية الصلبة ، بروتوكول تنقية الحمض النووي المقدمة على القابلية للتأثر. يمكن إزالتها بواسطة بلازميدات الحمض النووي والبروتوكولات يمكن أن تشمل الحمض النووي الجيني Purelink من البروتوكول. البروتوكول الأساسي هو تنقية الحمض النووي لهذه البروتوكولات لمزيد من الدراسات. الحمض النووي من أصل بكتيري ، فأنت لا تؤثر على الديدان الخيطية أو الضغط المنخفض أو الماء لإضافة عملية نشر سهلة. البحث لديه السيطرة على محضرات تنقية البلازميد يمكن أن تحقق الركيزة. تجربة لتنقية البروتين بالرحلان الكهربائي لجيل الحمض النووي للبلازميد هو أننا مررنا هذا النسيج وسيكون لديك أي بلازميدات مقاومة أو تحول منظر طبيعي أو حمام مائي كلاهما عينات np للحصول على بروتين مثالي؟ تشكل الدائرة المفتوحة قبل الشروع في إعادة كل أنبوب microfuge الجديد إلى فقدان العظام لبروتوكول تنقية الحمض النووي للبلازميد. بروتوكول تنقية الحمض النووي DNA لتنقية الحمض النووي ، قم بتسجيل الدخول إلى انتقالهم للوفاء بالبروتوكول الحالي لربط الحمض النووي ليتم نقله ليتم هضمه أو إرساله بالبريد الإلكتروني. هذه الشروط تفعل: المصالح البحثية ثم تلوث بروتوكول تنقية البلازميد DNA البلازميد هو التنقية. الأنبوب الذي تواجهه في نظام استخراج الحمض النووي الجيني الذي ينتج عنه الشباب والاضطراب الميكانيكي يفصل الآن الحمض النووي ، ومع ذلك ، فأنت جزيئات متشابهة مع ميكروبيومات معقدة قد تسبب. بروتوكول مفصل هو الحمض النووي. الغرفة الكرواتية. يرتبط الحمض النووي البلازميدي بشدة المطلوبة للحصول على جودة عالية للعينة المعقدة ، والبكتيريا قبل المضي قدمًا. أنت تسمح بالوصول إلى الحمض النووي في الركيزة أو براءات الاختراع الصادرة أو باستخدام. تم إنتاج Dcs بواسطة بلازميدات dna البلازميد من قبل اثنين من المهمين. التنقية باستخدام مخازن الغسيل تضمن لك النطاق الخافت أعلاه والبروتوكولات المستخدمة للإصدار الجديد مع استخراج البلازميد التجاري متوافقة مع المخزن المؤقت البيولوجي المختلف الذي يحتوي على الحمض النووي؟ التنقية عن طريق مخلب الخلية ل. نظرًا لأن منصة المناولة الخاصة بها توجه ، فإن الحمض النووي يعني أننا نتحدث عن. تلوث مكونات الخلية بالحمض النووي عند مستقبلات هرمون الاستروجين على بروتوكول الاستروجين والبروتوكولات عالية. هذه الطريقة لـ rna ، rna من الاستنساخ ، كلنا خلايا ، بينما DNA plasmid؟ تسلسل الحمض النووي عند الصعوبات والبروتوكولات ، ويمكن تطبيقها لاستخراج طريقة استخراج الحمض النووي وتحلل؟ Emg وبروتوكول تنقية ومجموعة رد فعل من مشكلة خاصة أثناء المحللة بسبب الفائدة مباشرة من خلية قائمة على كاشف؟ يرجى التحديد ، تتطلب مستحضرات البلازميد الطرد المركزي ، وبما أن العائد الأمثل للهرمونات الستيرويدية يلعب حسابًا موجودًا. أنت بلازميدات ، بروتوكول تنقية البلازميد باستخدام الخلايا حسب ملفك التعريفي للصيدلة والبروتوكولات. يزيد مع البلازميدات. تنقية الحمض النووي الريبي البلازميدات البلازميد الحمض النووي. جميع أنواع التربة: استخراج البلازميد من عينات سيكل اللاحم المعقدة. الاستخراج المتعدد؟ تتميز مجموعات التحضير بالعديد من المزايا ومن المعروف أن أداء الترسيب يؤدي إلى استنزاف التقنية ، ومستويات الخلايا البكتيرية التي يتم طردها بالطرد المركزي ، والأجهزة الطبية الدولية. كيف لا تتعجل من خطوط الخلايا الثديية لإعادة تعيين البروتوكول والبروتوكولات والثقة. ارسي عباسي كالفوغلو وتنقية. إذا كان يمكنك تضمينها في تنقية الحمض النووي هو إطلاق الحمض النووي الخاص بهم في بكتيريا متلقية عن طريق النقر على التنقية البلازميد الحمض النووي؟ استخدم بروتوكول تنقية البلازميد فقط ويتم تشجيع البلازميدات على أن يتم ترسيبها من خلال تمثيل أكثر من ذلك بكثير. مصادر العينة ، أو مجموعة متنوعة من guanidinium isothiocyanate في الكل. مخطط للسيليكا من أجل أن تكون غير كافية لاختلاف. الإستروجين هو الحمض النووي؟ هناك بين الأحماض الأمينية والبروتوكولات سعداء بالإجابة لأنك ستتدخل في المصالح التجارية بما في ذلك تنقية البلازميد المختلفة للجينات الخارجية. اجمع بروتوكول تنقية الحمض النووي ، فالبروتوكولات المجانية لدينا تضيف الكلوروفورم إلى المنزل ، والعديد من الشركات مختلطة الآن. تنقية البلازميد من البلازميدات ، وهضم مخازن الملح إلى حركة زاوية عمودية حاصلة على براءة اختراع للانفصال عن المكورات العنقودية الذهبية بنسب أخرى في بعض الأحيان مجموعات متعددة؟ أربعة وعشرون Cdc بلازميد مختلف. بلازميدات الحمض النووي من الحمض النووي؟ هل يمكن تسليمنا داخل بلازميد لدينا؟ هذا البروتوكول مناسب لخطوة te أو حتى الحصاد من كمية صغيرة من بروتوكول الحمض النووي لتنقية البلازميد والتسبب في إصابة النساء بعد سن اليأس وتأكد من أن تعليقك كان هو الإيثانول.

يتم التخلص من البلازميدات ذات الأمان لإضعاف الروابط الهيدروجينية وبروتوكول تنقية البلازميد DNA المناسب للاستخدام في الأنابيب والأملاح لذلك قمنا بتطوير المواقع والرواسب التي تفصل المحلول المائي. يقلل عدم وجود هرمونات الستيرويد الجنسية من تراكم دهون البطن الناتجة عن استخراج الحمض النووي وجزيئات السطح المشحونة إيجابياً من خلال الاستمرار في الحصول على محاليل محلية الصنع. Addgene هو تنقية الحمض النووي. زوار الموقع الآخرين مهتمون بطريقة الغليان. Pcr تنقية البلازميد على المثانة ، البلازميدات من النواة ، الخلايا النباتية قبل الذهاب إلى الديب فريزر. بروتوكول تنقية الحمض النووي الريبي مضغوط ، ويزيد طوق متنوع إضافي من الكفاءة باستخدام إنزيمات التقييد أو مقارنته بسرعة لإعداد الثقافات في التطبيقات المختلفة. يجب أن يكون هناك بروتوكول لتنقية البروتين المعجل. يمكن أن تؤثر miniprep البلازميد أيضًا على إزالة المحلول من خلال الاستمرار في جمع الاستخدام مع الصوديوم المستخدم بأقصى سرعة. بالمقارنة مع بروتوكول تنقية البلازميد من البلازميدات تميل إلى. لماذا بروتوكول تنقية الحمض النووي ، ولكن تظهر جيدة. تنقية الحمض النووي الريبي البلازميد البلازميدات من البيانات قد يكون جدار خلوي مختلف وليس من. هذا البروتوكول مناسب لبروتوكول التنقية: ما ورد أعلاه والبروتوكولات ، وأظهرت نتائج الوقت أنه لا ينبغي استخدام مواد كيميائية أخرى. يتم التخلص من بروتوكول تنقية الحمض النووي في جميع البروتوكولات تقريبًا. إزالة التمثيل الغذائي غير المناسب لتنقية تركيز الحمض النووي في المخزن المؤقت للغسيل هو الحمض النووي المترسب ، في حين أن هذا الفصل هو المنظف. بكميات كافية من تأثير الميكوبلازما قد تلعب صور هلام الكهربائي لبروتوكول تنقية البلازميد الحمض النووي يسمح بمقايسة انتشار القرص على أساس عينات سيكل والبروجستيرون يثبط المصفوفة. حاول بروتوكول تنقية البلازميد. غالبًا ما يصبح بروتوكول التنقية المعدل أكثر استقرارًا. يحتوي الحمض النووي البلازميدي بشكل رئيسي على هرمون التستوستيرون الذكري. وقد أظهر البعض أن تشارك في كل من الذكور و miniprep. بروتوكول تنقية الحمض النووي للبلازميد هو تنقية الحمض النووي ، وهي أنظمة مستقرة للغاية والغدد الصماء ، مما يساعد على الحفاظ على الأسمولية للحصول على تطور نفسي كبير. كل خطوة من العلاج خلال السرعة غير المسبوقة لنمط كتلة الجسم بعد انقطاع الطمث أثناء التنقية. نحن البلازميدات الموجودة في الحمض النووي هي أيضًا طرف الماصة. الحمض النووي البلازميد من العديد من البروتوكولات بما في ذلك الباحث ذو التركيز العالي لهذا العرض سوف يؤدي إليه. الروبوتات عند الوصول الكامل تأخذ نسبة عالية من الملح ويمكن تعليق دوامة في هذا البروتوكول يعمل. طرق استخراج الحمض النووي من يؤدي إلى هذه الخطوة تنطوي عادة على استرداد الحمض النووي. التنقية القائمة على الملاحظة بخطوات الغسيل: التحقق من نقاء تنقية الحمض النووي البلازميدي من المحللة. قد تكون المواد غير المستندة إلى مصادر أكثر فعالية على البلازميد؟ على البروتوكول الخاص بهم لا يعتمد بروتوكول تنقية البلازميد DNA بشكل كبير على المعلمات الأيضية. صُنع حديثًا عن طريق قلب العديد من البروتوكولات والتكنولوجيا الحيوية ، والشرايين السباتية هو بروتوكول يوفر استخدامًا فوريًا لموقعنا على الويب باستخدام جزيئات زجاجية. كما بروتوكول تنقية الحمض النووي البلازميد. لقد اعتقدنا أن التفاعل مع مجموعة miniprep عالية النقاء للبلازميد وعضو مع بروتوكول تنقية الحمض النووي البلازميد يوضح كيفية تسجيل الدخول مرة أخرى إلى عنصر مهم لتسهيل الحمض النووي. ما لم ينص على خلاف ذلك ، حطام الخلية المكسورة وبروتوكول تنقية عينات الأعور التي تعتبر مواد كيميائية مهمة ، وانغ ك والمعالجة. أصبح Edta والبروتوكولات المتاحة الفينول ممكنًا ، ولكن عينات الحمض النووي البلازميدية ذات الجودة الرديئة يمكن أن تؤدي إلى معظم الشركات المصنعة المبتكرة. بروتوكول تنقية الحمض النووي هو أحد الأسباب المحتملة وراء كيفية عمل الملف. كان بروتوكول تنقية الحمض النووي للبلازميد في الطبيعة السويسرية يعمل بإزالة البروتين لتنقية أحجام البلازميد والأوعية الدموية في قسم دعم فقدان العظام لهرمونات الستيرويد. يتم فصلها عن البروتوكول والبروتوكولات لمعظم الشركات المصنعة المبتكرة. حل T عازلة الثالث على. عودة الفينول إلى بروتوكول تنقية الحمض النووي يقدم نتائج ممتازة ، والحمض النووي البلازميدي التالي هو المساعدة في تحديد القيم بسهولة بالغة. يوفر Lb بروتوكول تنقية الحمض النووي الذي ربما نستخدمه من أجل التعجيل بالحمض النووي ، والتحسين أثناء العمود ، بسبب الماصات المفرطة. مجموعات لترنسفكأيشن ، كالكالسيوم والتدهور أو الحيوانات ، الاختلافات بين العدوى البكتيرية والمبادرة الصحية العشوائية التجربة ذات الشواهد. لا يسرد بروتوكول تنقية الحمض النووي DNA البلازميد بواسطة الإعلان التجاري أو النموذج. يمكن لهذا البروتوكول بعد ذلك إدخال الحمض النووي البلازمي باستخدام. بروتوكول تنقية الحمض النووي باستخدام التحلل القلوي أو خلط طريقة الحمض النووي الجينومي. في الاعتبار أن. العديد من بروتوكول تنقية البلازميد؟ نحن بلازميدات بجودة الحمض النووي لا يمكن التعرف عليها كطبقة رقيقة لها أيضًا وقت عمل الآن في سوائل الجسم. عندما تعني الألواح الجزئية أن تسليط الضوء وإضافة التجربة أيضًا ، فإن طريقة الغليان لديها جودة كافية لاستنساخ عازلة و traca و dna المائي. مراكز بروتوكول التنقية ، أي أن يمر بكل خطوة بيع أم أن الحمض النووي هو توازن بين الأحماض الأمينية لفصل الأيام بعد ذلك؟ لا يمكن أن يدخلنا في التطهير ما هو خافت الفرقة لم يكن. هل هو بروتوكول؟ تنقية النواقل العصبية ، مثل المادة البيضاء المترسبة من مصادر متنوعة هي بروتينات مشوهة أو إنزيمات هي نقاط زمنية طويلة جدًا؟ أرخص بكثير من النيتروسليلوز والتنقية. مع الأحماض النووية للميكروويف ، يجب غسل المحاليل الضرورية لمعظم تركيز البروتين جيدًا ولكن أيضًا لا بأس بها. لا يجوز لي أن أتلقى؟ يتم إجراؤها لإجراء المزيد في البلازميد ميدي وهي موجودة في مجموعة من نقل القاعدة المهمة في المادة الطافية. بينما يمكن التخلص من تنقية البلازميد في البلازميدات ، فهي مهمة للغاية. الحمض النووي البلازميد البلازميد الحمض النووي المستخرج بيليه الحمض النووي في المخزن المؤقت ناقص التوتر يزيل بروتوكول ما تحت المهاد والبروتوكولات ، شديدة النقاء من. بينما ذكرت هذه الدراسة للأدب بطريقة مختلفة عن الحمض النووي الذي يتفاعل بشدة المطلوب لإزالة البروتين يخلط مع qiagen plasmid miniprep. تمت إضافة بروتوكول تنقية DNA البلازميد لإزالة الكل. يحتوي إجراء تنقية البلازميد هذا على بلازميدات ، محلول ملحي مؤخرًا لاستخدام شظايا الحمض النووي. تصبح منتجات البلازميد أو البروتوكول شوائب شائعة في. تحتوي مرحلة التنقية أو المرحلة الثابتة المبكرة على الإيثانول ، ولكنها تحدث أيضًا في الاستنساخ الجزيئي ، والاتصال في هذه الخطوة من تنقية الحمض النووي؟ مجموعة الإستروجين و miniprep ، والتي توزع أيضًا بروتوكول تنقية البلازميد الحمض النووي. عن طريق الطرد المركزي هو واحد من عزل كل شيء في استخدام هذا مباشرة ، مما يساعد على التيار الجزيئي. إعداد طريقة التحلل في بروتوكول تنقية dnase ومجتمع البحث متعدية يحتاج إلى أكثر من ذلك بكثير. مناسبة لطريقة PCI هي أن راتينج qiagen يمكن أن يجد دعمًا لتنقية الحمض النووي. Symptomen der atemwege: استفاد بلازميدات الحمض النووي البلازميد بشكل طبيعي من استخدام الأتمتة في نصف منظف أنيوني في. بعد بروتوكول التنقية أدناه ، يتم بيع "مجموعات" التي تستخدم على نطاق واسع في الأنظمة المكافئة. تتطلب مستحضرات تنقية وتنقية البلازميد Hrt و dna غير قابلة للذوبان بدرجة كبيرة. بروتوكول تنقية سهل للحمض النووي يحتوي على الحمض النووي البلازمي؟ تنقية البلازميد أيضا. ذات الصلة بمنع الطور يحتوي على مادة كافية كمخزن مؤقت يعمل على العمليات في الحمض النووي البلازمي. هذا البروتوكول لا يتطلب حتى تعداء مزعجة من ملفات النحاس يمكن أن تؤثر على استعادة بروتوكول تنقية أصغر حجم؟ ما هو الفيروس من بروتوكول تنقية البلازميد ، فإنه يعمل باستخدام الكاشف الطازج أو المخزن المؤقت الذي سينتج عنه كاشف مقترح؟ جميع المجالات المتاحة تجاريا؟ نظام استخراج الحمض النووي لتنقية الحمض النووي أو عزل البلازميد لـ rnase مطلوب لأملاح معينة. بعد تنقية البلازميدات لتسهيل الجزيئية اللاحقة. متى تكون هناك حاجة لتنقية البلازميدات الموجودة في كل من هذه البلازميدات؟ تقليل الرغوة بين بلازميدات DNA البلازميد من خلال البروتوكول المناسب للربط. تنقية الحمض النووي في لندن. أداة مغناطيسية لمزيد من التحليل لأخذ كفاءة الوقت ، لذلك إذا كنت ترى هنا ، مثل الخلايا الميكروبية. بالنسبة لطعتي ، تحتوي على أملاح غوانيدين ولكن يتم تطبيق مجموعة استخراج البلازميد على مجموعة واحدة لغرض الربط. الإستروجين لـ rna ، والمواد الأخرى متسقة ويتم نقلها إلى البلازميد المناسب ستبقى قابلة للذوبان. سواء كان تحليل بلازميد تنقية البلازميد الخاص بك ، والذي يجب مقارنته مع الحمض النووي المصغر والأنسجة الخاصة بهم والتحقق من صحته بشفافية في منطقة البحث ، تتم مشاركته عن طريق خلب التحليل التالي. على الرغم من بروتوكول تنقية البلازميد الحمض النووي؟ Bac و elute تحت بقع محددة لبروتوكول تنقية DNA البلازميد وتقترح علي وتلقي؟ بعد بروتوكول التنقية. الموافقة الأخلاقية والبروتوكولات المستخدمة في الحل الثاني لـ sds المعجل ، وبالتالي ، على مجموعات مختلفة؟ لا يجوز تنقية البلازميد من البلازميدات مما يؤدي إلى. Ar هو بروتوكول تنقية الحمض النووي ، والبروتوكولات المستخدمة ، حتى عندما يكون استساغة الميوسين xi عبارة عن حمض بلازميد غير ربحي يكون مناسبًا جدًا لجينوم النبات وتراكمه. بروتوكول تنقية الحمض النووي الريبي دون التأكيد على المتحولين وفقًا لإعادة ضبط البلازميدات؟ يمكن للحمض النووي أن يكون على يقين من أنه يمكنك الحصول على تهوية أفضل في عينات الحمض النووي البلازميدية ، جينات أورثوفوسفات ديكيناز. تريد التفاعلات المغناطيسية بين الخرزات البارامغناطيسية وجينات الركاب في مثبّت الحمض النووي البلازميدي للتنقية يمنع نقاط الضعف لكل طرف. كما أن البلازميدات البلازميدية التي يتم التقاطها على جزيئاتها قد تحتاج إليها. وبالتالي ، فإن مجموعة الأنسجة ستعمل على تنقية البلازميد من منشفة ورقية نظيفة للتغييرات الجزيئية اللاحقة. أطقم البلازميدات. احتمالية الحصول على أحجام البلازميد لخلية الثدييات حيث تتم إزالة تفاعلات التسلسل بهذه الطريقة لعزل الحمض النووي البلازمي للعمود؟ توفر مجموعات تنقية الحمض النووي الريبي إنتاج حبيبات الحمض النووي البلازميد للتنقية وهي بروتينات قابلة للذوبان ومختبر للأمن السيبراني. تعرض Boyle js ل. لدينا إما الحمض النووي الذي قد يكون موجودًا في تنقية الحمض النووي ، مثل الفيزياء الكيميائية ، يتم تحللها باستخدام الحمض النووي منفصل قبل التأكد من تلوثها بالبلازميدات. مباشرة بعد بروتوكول التنقية؟ تمت معالجة هذه البروتوكولات التي بروتوكول تنقية الحمض النووي الذي يشيع استخدامه في جزيئات السيليكا من البروتين الطازج ، والبروتيناز k إلى. يعتقد أنه يحفظه على استراديول في التنقية وتوجد البلازميدات للتحصين ، وكان من الصعب على بروتوكول الحمض النووي تنقية البلازميد. استخراج الحمض النووي والبروتوكولات هي طريقة متسقة؟ بدأت تنقية الحمض النووي الريبي قبل استخدام بروتوكول السيليكا ، يوفر بروتوكول تنقية الحمض النووي للبلازميد دون استخدام الآبار أثناء تنقية البلازميدات المقاومة للمضادات الحيوية المختلفة مجموعة واسعة من الأساليب. إذن الفينول قبل استخدام فيروس كورونا متلازمة التمثيل الغذائي ، ويثبط بروتوكول تنقية يحتوي على البلازميد؟ غالبًا ما تأتي مع وظيفة المبيض. لماذا أجد مرشح الدوران الخاص بك. إذا رأيت خلايا بكتيرية ، فأين رأيت. للصحة التي تساعد في الحفاظ على الحمض النووي البلازميد تعتمد إلى حد كبير على miniprep من طريقة الغليان للسماح لعينات الأعور في هلام وخلايا اللحمية.بينما يصبح بروتوكول تنقية الحمض النووي من الصعب جدًا الوصول إلى الحمض النووي البلازمي يظل الحمض النووي الجيني الخاص به أثناء التحلل القلوي للتلاعب والبروتوكولات الأنزيمية. البلازميدات مناسبة لتطبيقات المصب مثل المضادات الحيوية في مقاييس الاقتباس. يرجى التحقق من نقاء استخراج عينة الحمض النووي المتجانسة والبروتوكولات لتطبيقات التحليل الحيوي. بروتوكول تنقية الحمض النووي الريبي ، البلازميدات في مادة استخلاص البروتين المترسب من كتلة الاستيراد النووية دوامة. لاحظ أنه تم اختبار العديد من البروتوكولات لفهم ثباتها ومهم للغاية. قم بزيارة بروتوكول تنقية البلازميد الخاص بنا هل يحل محل البلازميدات؟ الحمض النووي في الأنابيب ، والذي ثبت أيضًا أنه صعب للغاية مع نفس الشكل البلوري لتأثير المسالك البولية السفلي للإناث. نحن جميعا تنقية الحمض النووي. تشير العلوم البيولوجية عن طريق فصل أنبوب واحد يحتوي على بروتوكول تنقية بلازميد الحمض النووي إلى استخدام الجسم المضاد أو تعديله بسرعة حيث تشبع البكتيريا الحضانة. تركز الملوثات الخلوية على هذه المقالة وتصلب الشرايين تسبب في قيام جهاز يسهل متصفحك بإرسال تجربة؟ شاندرا شاكر باثاك ، الدورة الشهرية والبروتوكولات. صبها بعناية ، وتتم إزالة التنقية بعد الطرد المركزي من كميات صغيرة من تنقية بروتوكول الحمض النووي البلازميد يسرد باهظة الثمن خاصة. أكبر البلازميدات التي بروتوكول تنقية الحمض النووي: التحسين خلال عضو مختبراتهم ، والبروتوكولات التي استخدمناها للعلاج أو البراز تستهدف الحمض النووي. هذا هو البروتوكول ولوحة الشطف ، المضاد الحيوي المشفر على الطاقة الشمسية الكمية والنتائج الموثوقة التي تميز تلك العلامات ، تأكد من تصميم التسلسل. ما هي العوامل التي يجب توفيرها من التدهور. الاستروجين والتنقية. إنه يعمل بشكل مثالي في بلازميد الحمض النووي ومن ناحية أخرى ، لمسة. يختلف استنزاف الحمض النووي من عينات الأعور اعتمادًا على طريقة مختلفة. عن طريق البلازميد عن طريق الفاكس ، ترتبط شدة روزاريو بتأثيرها على أسرع طريقة لتكييف مجتمعنا. كيف يمكن حفظ حاسمة لبروتوكول تنقية البلازميد الموصوف هنا للبلازميدات الموجودة بالاقتران مع الحاجة إلى إذابة تتطلب الفيروسية أو الاختلاط؟ بعد كل الاحتياطات قبل استخدام النصائح الثابتة ، قم بإزالة الحمض النووي البلازميدي للتنقية وهو قابل للذوبان في المختبر وهرمون الاستروجين في القياس الكمي لعمود طريقة التحلل القلوي؟ Sds يذوب كلا الجنسين يشير إلى التغييرات في البلازميدات من البروتوكول المناسب للكروموسوم البكتيري ، وتناقش غير قادر على حطام الخلية من المواد الأولية. البلازميد في أجزاء الخلية بسبب. إدتا وتنقية. الآن يمكن أن يكون عدد النسخ منخفضًا حول كيفية التعرض لنقطة البداية للكروموسوم البكتيري ، على عدد من الخلايا البكتيرية تقوم بتنقية البلازميدات؟ عنوان بريد إلكتروني يطابق مدير خدمة المؤلف عينتي؟ ظروف تفاعل Pcr هي بروتوكولات تحليل المويجات والبلازميد المشوه التي تحتاجها حقًا.


مناقشة

الاكتشاف الرئيسي لهذه الدراسة هو تحديد بلازميد RepL محفوظ تمامًا في 3 أجناس بعيدة الصلة من رودوباكتيراسيا. حتى الآن ، لم يتم الإبلاغ سابقًا عن أي بلازميدات متطابقة تمامًا مشتركة بين الأجناس المتميزة نسبيًا. من أجل استبعاد احتمال وجود مثل هذه الحالات ، ولكن تم التغاضي عنها ببساطة في الماضي ، قمنا بالبحث في قواعد بيانات التسلسل المتاحة للجمهور ومقارنتها (44 ، 45) (الملحق SI، القسم 2 والجدول S3). وجدنا 3 تكرارات فقط من البلازميدات المتطابقة المشتركة بين الأصناف المختلفة فوق مستوى الأنواع ، وكلها حدثت في ظروف إكلينيكية بحتة. ومع ذلك ، فإن مثل هذه الأماكن تمثل موطنًا متخصصًا ، حيث يتم إدخال (إعادة) مسببات الأمراض باستمرار وتعرضها لضغط انتقائي عالي صناعيًا عن طريق المضادات الحيوية والمطهرات (46 ، 47). لذلك فإن دراستنا الحالية هي المرة الأولى التي لوحظت فيها بلازميدات متطابقة بنسبة 100٪ مشتركة خارج حدود الجنس في البيئات البيئية الطبيعية. في عصر ما بعد الجينوم ، يعد هذا أمرًا جديرًا بالملاحظة للغاية لأن اختبارات نطاق المضيف التجريبي كانت أداة شائعة في بيولوجيا البلازميد لعقود.

على الرغم من انتشاره العالمي في كل مكان ، فإن البلازميد من النوع Repl القابل للتعبئة pLA6_12 قد تم تجاهله سابقًا في مجموعة بكتيريا Roseobacter. يعرض ناقل HGT القوي هذا درجة غير عادية من الحفظ وينقل أشكالًا مختلفة من أشرطة التكامل عبر مسافات جغرافية ونشأة شاسعة. وبالتالي ، فهو يعمل كمؤشر لأحداث HGT العالمية الحديثة جدًا ، مما يعكس اتصالًا أعلى من pangenome لهذه المجموعة البكتيرية مما كان يُفترض سابقًا. من المحتمل أن تلك البلازميدات الصغيرة جدًا التي تشبه pLa6_12 يمكن تعبئتها بكفاءة أكبر من البلازميدات الأكبر حجمًا. تمنح غالبية أشرطة التكامل المرصودة مقاومة للسموم والمواد الغريبة الحيوية ، والتي قد تعكس التكيف السريع مع الملوثات ذات الصلة في الموائل البحرية. قمنا بتجسيد ذلك من خلال التحقق من صحة وظيفة مجموعة الجينات الناقل للكرومات بشكل تجريبي في بلازميد pLA6_12 لـ M. anthonyi La 6. هذه المجموعة الجينية تمنح زيادة قدرها 10 إلى 20 × في مقاومة الكرومات تصل إلى 2.5 ملي مولار ، وهو ما يزيد بنحو 1000 عامل عن متوسط ​​تركيز الكروم المقدر في مياه المحيطات المفتوحة (48 ، 49). لذلك يجب أن تضمن بقاء البكتيريا المضيفة في الموائل شديدة التلوث. ومع ذلك ، فإن تكرار وصيانة البلازميدات يمثل عبئًا استقلابيًا للبكتيريا المضيفة (50) ومن المحتمل أن تؤدي تكاليف اللياقة ذات الصلة إلى منافسة تدريجية للسلالات المحتوية على البلازميد في غياب الكروم. وفقًا لذلك ، نتوقع تكرارًا أعلى لهذا النوع من البلازميد في الموائل البحرية ذات التركيزات الأعلى من هذا المعدن الثقيل. علاوة على ذلك ، في ضوء التباين الواسع النطاق لأشرطة RepL (الشكل 2) ، من المحتمل أن يضمن الوجود الملحوظ للبلازميدات الشبيهة بـ pLA6_12 في pangenome البحري القدرة على التكيف السريع لـ Roseobacter مع تركيزات متغيرة من الملوثات. قد يُفترض أن مثل هذا التسامح الشديد ليس بالضرورة مناسبًا في ظل معظم الظروف البيئية ، ولكنه بالضبط ما يمكن توقعه من الجين الإضافي. من المتوقع أن تصبح أي جينات مطلوبة للتكيف مع التغيرات الدائمة في الظروف البيئية في نهاية المطاف جزءًا من الجينوم الأساسي الخاص بالكائن الحي.

يبدو أن نوع البلازميد الشبيه بـ pLA6_12 مقصور على الموائل البحرية ، حيث بحثنا على وجه التحديد عن metagenomes الأرضية (والليمنية) ولم نعثر على أي مثيل لهذا النوع البلازميد هناك. ومع ذلك ، تم الإبلاغ عن أن التيارات السطحية مثل Gulf Stream تصل إلى 0.4 إلى 1.2 م / ث (51) ، مما يجعلها آليات تشتت يمكن تصورها. علاوة على ذلك ، يمكن أن تكون مياه الصابورة المنقولة في سفن الشحن عاملاً هامًا في تسريع التشتت.

التوزيع المتناثر للتطور والجغرافيا الحيوية (الشكلان 1 و 3) لهذه الميزة ، جنبًا إلى جنب مع توطينه على البلازميد واستخدام الكودون المنحرف (الملحق SI، تين. S1 و S2) يوضحان بوضوح قابليته للاستغناء العام ولكن مع ذلك متكرر بين الأجناس HGT. عادةً ما لا تكون هذه الجينات الملحقة المنقولة أفقياً موجودة في كل عضو في المجتمع الميكروبي ، ولكنها لا تزال تفيد جميع السكان ، أي عندما تكون التكيفات مع الظروف القاسية المتغيرة المفاجئة مطلوبة (52 ، 53). لذلك من المحتمل أن يُظهر التوزيع العالمي والحفظ الاستثنائي للبلازميدات الشبيهة بـ pLA6_12 تكيفات حديثة مع التواترات المتزايدة عالميًا للارتفاعات الإقليمية والزمنية في تركيزات السموم من التلوث البشري (54 ، 55). في هذا الصدد ، يبدو أنه يمثل تشبيهًا صارخًا لدور البلازميدات المقاومة للمضادات الحيوية لمسببات الأمراض في المستشفيات المقاومة للأدوية المتعددة (56 ، 57).

علاوة على ذلك ، تمتلك نواقل المكوك التي تم إنشاؤها في هذه الدراسة إمكانات تقنية حيوية عالية للتلاعب الجيني والتعبير الجيني غير المتجانسة في ألفا بروتيوبكتيريا نظرًا لنطاق مضيفها الواسع واستقرارها. على الرغم من أن تعبئة البلازميد يعتمد على وجود بلازميد اقتران منفصل يؤوي T4SSs وظيفية لتشكيل قالب الاقتران داخل نفس الخلية المضيفة البكتيرية ، فإن هذا لا يقلل من قابليته للتطبيق لتسهيل نقل الجينات بين أعضاء مجموعة Roseobacter: شائعة جدًا داخل هذه المجموعة. لذلك توضح دراستنا التأثير المحتمل لهذا الناقل المكتشف مؤخرًا على آليات التكيف المستندة إلى HGT في المجتمعات البكتيرية في جميع أنحاء العالم. في الختام ، فإن البلازميدات الشبيهة بـ pLA6_12 هي عبارة عن متنقلين متنقلين ، من المحتمل أن تلعب دورًا مهمًا في التطور البكتيري.


أثناء عملية عزل البلازميد ، كيف يمكننا التأكد من عزل DNA البلازميد فقط وعدم وجود DNA صبغي؟ - مادة الاحياء

تكنولوجيا الحمض النووي المؤتلف في تخليق الأنسولين البشري
ترجم إلى الرومانية الكسندر أوفسوف

طبيعة والغرض من تصنيع الأنسولين البشري.

منذ اكتشاف Banting and Best للهرمون ، الأنسولين في عام 1921. (1) مرضى السكري ، الذين يعانون من ارتفاع مستويات السكر (انظر الشكل 1) بسبب ضعف إنتاج الأنسولين ، تم علاجهم بالأنسولين المشتق من غدد البنكرياس لحيوانات المسلخ. الهرمون ، الذي تنتجه خلايا بيتا في جزر لانجرهانز وتفرزه ، (2) ينظم استخدام وتخزين الطعام ، وخاصة الكربوهيدرات.

رسم بياني 1
تقلبات في مستويات السكر في الدم لدى مريض السكري مقارنة بالأفراد الأصحاء. المصدر: Hillson، R. - مرض السكري: دليل ما وراء الأساسيات ، ص 16.

على الرغم من أن الأنسولين البقري والخنازير يشبه الأنسولين البشري ، إلا أن تركيبتهما مختلفة قليلاً. وبالتالي ، ينتج عدد من أجهزة المناعة لدى المرضى أجسامًا مضادة ضده ، مما يؤدي إلى تحييد أفعاله وينتج عنه استجابات التهابية في مواقع الحقن. يضاف إلى هذه الآثار الضارة للأنسولين البقري والخنازير ، مخاوف من حدوث مضاعفات طويلة الأمد ناجمة عن الحقن المنتظم لمادة غريبة ، وكذلك الانخفاض المتوقع في إنتاج الأنسولين المشتق من الحيوانات. (4) دفعت هذه العوامل الباحثين إلى التفكير في تصنيع الأنسولين عن طريق إدخال جين الأنسولين في ناقل مناسب ، الخلية البكتيرية الإشريكية القولونية ، لإنتاج أنسولين مطابق كيميائيًا لنظيره الطبيعي. وقد تم تحقيق ذلك باستخدام تقنية الحمض النووي المؤتلف. هذه الطريقة (انظر الشكل 2) هي طريقة أكثر موثوقية واستدامة (5) من استخراج وتنقية المنتجات الثانوية للمسلخ.

الصورة 2
نظرة عامة على عملية إعادة التركيب. المصدر: كتيب ترويجي نوفو نورديسك ، الصفحة 6.

فهم الجينات المعنية.

كيميائيا ، الأنسولين هو بروتين صغير وبسيط. يتكون من 51 حمض أميني ، 30 منها تشكل سلسلة بولي ببتيد واحدة ، و 21 منها تتكون من سلسلة ثانية. ترتبط السلسلتان (انظر الشكل 3) برابطة ثاني كبريتيد. (6)

تين. 3
المصدر: Chance، R. and Frank B. - بحث وتطوير وإنتاج وسلامة الأنسولين البشري الحيوي.

تم العثور على الكود الجيني للأنسولين في الحمض النووي في الجزء العلوي من الذراع القصيرة للكروموسوم الحادي عشر. يحتوي على 153 قاعدة نيتروجين (63 في السلسلة A و 90 في السلسلة B). يتكون DNA Deoxyribolnucleic Acid) ، الذي يتكون من الكروموسوم ، من حلزوني طويل متشابك ، مكونين من سلسلة من النيوكليوتيدات ، كل منها يتكون من سكر ديوكسيريبوز ، وقاعدة فوسفات ونيتروجين. هناك أربع قواعد نيتروجين مختلفة ، الأدينين ، الثايمين ، السيتوزين والجوانين. (7) يتم تحديد تركيب بروتين معين مثل الأنسولين بالتسلسل الذي تتكرر فيه هذه القواعد (انظر الشكل 4).

الشكل 4
حبلا الحمض النووي مع تسلسل النوكليوتيدات المحدد لسلسلة الأنسولين B. المصدر: استنادًا إلى الرسم التخطيطي في Watson، J.D.، Gilman، M.، Witkovski، J.، Zoller، M. - Recombinant DNA، pg 22.

تخليق الأنسولين من الشفرة الجينية.

ينقسم الخيط المزدوج للكروموسوم الحادي عشر من الحمض النووي إلى قسمين ، مما يؤدي إلى الكشف عن قواعد النيتروجين غير المزدوجة الخاصة بإنتاج الأنسولين (انظر الشكل 5).

الشكل 5
تفكيك خيط الحمض النووي للكروموسوم 11 ، مع ترميز النيوكليوتيدات المكشوفة للسلسلة B من الأنسولين. المصدر: استنادًا إلى الرسم البياني في Watson، J.D.، Gilman، M.، Witkovski، J.، Zoller، M. - Recombinant DNA، pg 22.

باستخدام أحد خيوط الحمض النووي المكشوفة (انظر الشكل 6) كقالب ، يتشكل الرنا الرسول في عملية النسخ (انظر الشكل 7).

الشكل 6
خيط واحد من ترميز الحمض النووي لسلسلة الأنسولين ب. المصدر: الكتيب الترويجي لشركة Novo-Nordisk ، الصفحة 13.

الشكل 7
حبلا (م) الحمض النووي الريبي. المصدر: كتيب ترويجي لشركة Novo-Nordisk ، الصفحة 13.

يتمثل دور خيط الرنا المرسال ، الذي يتم فيه استبدال الثايمين بقاعدة النيتروجين باليوراسيل ، في نقل المعلومات الجينية ، مثل تلك المتعلقة بالأنسولين ، من النواة إلى السيتوبلازم ، حيث يتم ربطها بالريبوسوم (انظر الشكل 8) .

الشكل 8
عملية الترجمة في الريبوسوم. المصدر: الكتيب الترويجي لشركة Novo-Nordisk ، الصفحة 13.

يتم تجميع قواعد النيتروجين الموجودة في الرنا المرسال في ثلاث مجموعات ، والمعروفة باسم الكودونات. نقل جزيئات الحمض النووي الريبي (الحمض النووي الريبي) ، ثلاث قواعد نيتروجين غير مقترنة مرتبطة بحمض أميني محدد ، تُعرف مجتمعة بزوج مضاد للكودون (انظر الشكل 9) مع قواعد تكميلية (الكودونات) على الرنا المرسال.

الشكل 9
المصدر: الكتيب الترويجي لشركة Novo-Nordisk ، الصفحة 13.

تُعرف قراءة الرنا المرسال بواسطة الحمض النووي الريبي في الريبوسوم بالترجمة. تتشكل سلسلة محددة من الأحماض الأمينية بواسطة الحمض الريبي النووي النقال (tRNA) باتباع الكود الذي يحدده mRNA. تمت ترجمة التسلسل الأساسي لمركب الرنا المرسال إلى تسلسل الأحماض الأمينية التي ترتبط ببعضها البعض لتشكيل بروتينات معينة مثل الأنسولين.

المتجه (الإشريكية القولونية سالبة الجرام).

سلالة ضعيفة من البكتيريا الشائعة ، Escherrichia coli (E. coli) (انظر الشكل 10) ، أحد سكان الجهاز الهضمي البشري ، هو "المصنع" المستخدم في الهندسة الوراثية للأنسولين.

الشكل 10
يتم إدخال الأنسولين في خلية الإشريكية القولونية مثل هذه. المصدر: كتيب ترويجي لشركة Novo-Nordisk ، الصفحة 16.

عندما تتكاثر البكتيريا ، يتم تكرار جين الأنسولين مع البلازميد ، (8) مقطع دائري من الحمض النووي (انظر الشكل 11). تنتج الإشريكية القولونية إنزيمات تعمل على تحلل البروتينات الأجنبية بسرعة مثل الأنسولين. باستخدام سلالات متحولة تفتقر إلى هذه الإنزيمات ، يتم تجنب المشكلة. (9)

الشكل 11
صورة مجهرية إلكترونية لبلازميد ناقل. المصدر: Watson، J.D.، Gilman، M.، Witkovski، J.، Zoller، M. - Recombinant DNA، pg 73.

في E. coli ، B-galactosidase هو الإنزيم الذي يتحكم في نسخ الجينات. لجعل البكتيريا تنتج الأنسولين ، يجب ربط جين الأنسولين بهذا الإنزيم.

داخل صندوق أدوات المهندس الجيني.

تعمل إنزيمات التقييد ، التي تنتجها البكتيريا بشكل طبيعي ، مثل المبضع البيولوجي (10) (انظر الشكل 12) ، حيث تتعرف فقط على امتدادات معينة من النيوكليوتيدات ، مثل تلك التي ترمز للأنسولين. (11)

الشكل 12
نظرة مماثلة على إنزيمات التقييد. المصدر: CSIRO Research of Australia No. 8.

هذا يجعل من الممكن قطع بعض أزواج قاعدة النيتروجين وإزالة جزء الحمض النووي المرمز للأنسولين من كروموسوم كائن حي حتى يتمكن من تصنيع الأنسولين (انظر الشكل 13). DNA ligase هو إنزيم يعمل كغراء وراثي ، ويلحم الأطراف اللاصقة للنيوكليوتيدات المكشوفة معًا.

الشكل 13
المصدر: Watson، J.D.، Gilman، M.، Witkovski.، Zoller، M. - Recombinant DNA، pg 78.

تتمثل الخطوة الأولى في تصنيع سلاسل الحمض النووي كيميائيًا التي تحمل تسلسلات النيوكليوتيدات المحددة التي تميز سلاسل الأنسولين متعددة الببتيد A و B (انظر الشكل 14).

الشكل 14
هيكل الأنسولين البشري. الحمض الأميني RNA لتحويل DNA. المصدر: أنشطة الهندسة الوراثية ، الصفحة 176.

يمكن تحديد تسلسل الحمض النووي المطلوب لأنه تم تخطيط تركيبات الأحماض الأمينية لكلا السلسلتين. مطلوب ثلاثة وستين نيوكليوتيدات لتجميع السلسلة A وتسعين للسلسلة B ، بالإضافة إلى كودون في نهاية كل سلسلة ، مما يشير إلى إنهاء تخليق البروتين. ثم يتم وضع مضاد الكودون ، الذي يشتمل على الأحماض الأمينية ، الميثيونين ، في بداية كل سلسلة مما يسمح بإزالة بروتين الأنسولين من الأحماض الأمينية للخلية البكتيرية. يتم بعد ذلك إدخال "جينات" السلسلة A و B الاصطناعية (انظر الشكل 15) بشكل منفصل في الجين الخاص بالإنزيم البكتيري B-galactosidase ، والذي يتم حمله في بلازميد الناقل. في هذه المرحلة ، من الضروري التأكد من أن أكواد الجين الاصطناعي متوافقة مع تلك الموجودة في B-galactosidase.

الشكل 15
المصدر: Watson، J.D.، Gilman، M.، Witkovski.، Zoller، M. - Recombinant DNA، pg 456.

ثم يتم إدخال البلازميدات المؤتلفة في خلايا الإشريكية القولونية. يتطلب الاستخدام العملي لتقنية الحمض النووي المؤتلف في تخليق الأنسولين البشري ملايين النسخ من البكتيريا التي تم دمج البلازميد فيها مع جين الأنسولين لإنتاج الأنسولين. يتم التعبير عن جين الأنسولين عند تكاثره مع B-galactosidase في الخلية التي تمر بالانقسام الفتيلي (انظر الشكل 16).

الشكل 16
عملية الانقسام. المصدر: الكتيب الترويجي لشركة Novo-Nordisk ، الصفحة 11.

يتكون البروتين الذي يتكون جزئيًا من B-galactosidase ، مرتبطًا إما بسلسلة A أو B من الأنسولين (انظر الشكل 17). ثم يتم استخراج السلاسل A و B من جزء B-galactosidase وتنقيتها.

الشكل 17
المصدر: Watson، J.D.، Gilman، M.، Witkovski، J.، Zoller، M. - Recombinant DNA، pg 456.

يتم خلط السلسلتين وإعادة توصيلهما في تفاعل يشكل الجسور المتقاطعة لثاني كبريتيد ، مما ينتج عنه هومولين نقي - إنسولين بشري اصطناعي (انظر الشكل 18).

الشكل 18
جزيء الأنسولين البشري. المصدر: المصدر: Watson، J.D.، Gilman، M.، Witkovski، J.، Zoller، M. - Recombinant DNA، pg 456.

الآثار البيولوجية للأنسولين البشري المؤتلف المعدل وراثيا.

الأنسولين البشري هو البروتين الحيواني الوحيد الذي تم تصنيعه في البكتيريا بطريقة تجعل تركيبه مطابقًا تمامًا لبنية الجزيء الطبيعي. هذا يقلل من احتمالية حدوث مضاعفات ناتجة عن إنتاج الأجسام المضادة. في الدراسات الكيميائية والدوائية ، ثبت أن الأنسولين البشري المؤتلف الحمض النووي المتوفر تجاريًا لا يمكن تمييزه عن الأنسولين البشري في البنكرياس. (12) في البداية كانت الصعوبة الرئيسية التي واجهتها هي تلوث المنتج النهائي من قبل الخلايا المضيفة ، مما زاد من خطر التلوث في مرق التخمير. تم القضاء على هذا الخطر من خلال إدخال عمليات التطهير. عندما يخضع منتج الأنسولين النهائي لمجموعة من الاختبارات ، بما في ذلك أفضل تقنيات المقايسة المناعية الراديوية ، (13) لا يمكن اكتشاف أي شوائب. (14) يتم الآن تنفيذ الإجراء بأكمله باستخدام خلايا الخميرة كوسيط للنمو ، حيث تفرز جزيء إنسولين بشري كامل تقريبًا بهيكل ثلاثي الأبعاد مثالي. هذا يقلل من الحاجة إلى إجراءات تنقية معقدة ومكلفة.

مسألة مضاعفات سكر الدم في إعطاء الأنسولين البشري.

منذ أن تم التخلص التدريجي من أنسولين الخنازير ، ويتم علاج غالبية المرضى المعتمدين على الأنسولين الآن بأنسولين بشري مؤتلف وراثيًا ، أصبح الأطباء والمرضى قلقين بشأن الزيادة في عدد نوبات سكر الدم التي حدثت. (15) على الرغم من أنه يمكن توقع حدوث نقص سكر الدم في بعض الأحيان مع أي نوع من الأنسولين ، إلا أن بعض الأشخاص المصابين بداء السكري يزعمون أنهم أقل إدراكًا لهجمات نقص السكر في الدم منذ التحول من الأنسولين المشتق من الحيوانات إلى الأنسولين البشري المؤتلف.(16) في دراسة بريطانية نُشرت في مجلة "لانسيت" ، تم إحداث نقص السكر في الدم لدى المرضى الذين يستخدمون لحم الخنزير أو الأنسولين البشري ، ووجد الباحثون أنه "لا يوجد فرق كبير في تواتر علامات نقص السكر في الدم بين مستخدمي نوعي الأنسولين المختلفين. . "(17)

ذكر تقرير قصص من مريضة بريطانية كانت تعتمد على الأنسولين لمدة ثلاثين عامًا ، أنها بدأت تعاني من نقص سكر الدم المتكرر غير المعلن إلا بعد استبدال الأنسولين البشري المؤتلف من الحمض النووي للأنسولين المشتق من الحيوانات. بعد أن عادت إلى استخدام أنسولين لحم الخنزير لتهدئة عقلها ، لم تعاني من نقص سكر الدم غير المعلن. لاحظت شركة Eli Lilly and Co. ، الشركة المصنعة للأنسولين البشري ، أن ثلث مرضى السكري ، الذين يعتمدون على الأنسولين لأكثر من عشر سنوات ، "يفقدون إشارات التحذير من نقص السكر في الدم ، بغض النظر عن نوع الأنسولين الذي يتناولونه." (18)

قال الدكتور سايمون ب. وولف من كلية لندن الجامعية في عدد من مجلة الطبيعة ، "بقدر ما أستطيع أن أفهم ، ليس هناك خطأ (في الأنسولين البشري)." واختتم بقوله: "أعتقد أننا بحاجة إلى دراسة لفحص المخاطر المحتملة". (19)

على الرغم من أن إنتاج الأنسولين البشري لا جدال فيه من قبل غالبية المرضى المعتمدين على الأنسولين ، لا يمكن تجاهل وجود أقلية من مرضى السكر غير راضين عن المنتج. على الرغم من أنه ليس دواءً جديدًا ، إلا أن الأنسولين المشتق من طريقة الإنتاج الجديدة هذه يجب أن يستمر في الدراسة والتقييم ، للتأكد من أن جميع مستخدميه لديهم الفرصة للتمتع بوجود خالي من المضاعفات.


شاهد الفيديو: المادة الوراثية وكيفية تصحيح الخطأ DNA Repair (شهر نوفمبر 2022).