معلومة

تضخيم التحقيق في MLPA

تضخيم التحقيق في MLPA


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أقرأ مقالًا حول MLPA (تضخيم مسبار متعدد يعتمد على الربط) وقد علقت في هذه الجملة:

ميزة تقسيم المسبار إلى جزأين هي أنه يتم تضخيم قليل النوكليوتيدات المربوطة فقط ، ولكن ليس قليلات النوكليوتيدات غير المنضمة للمسبار.

المبدأ الذي لا أفهمه هو لماذا لا يتم تضخيم قليل النوكليوتيدات غير الملقحة؟ كما هو فهمي الحالي لـ PCR ، يجب أن تتحلل البادئات عادةً وتنتج شظايا تنتهي في نهاية قليل النوكليوتيد (في "موقع الربط" - لذا ستكون أقصر ، لكن يجب أن تكون موجودة) ، هل أنا مخطئ ؟


أنا أعمل لدى MRC-Holland ، مطور MLPA ، وما يشرح Kacper هو الحال بالفعل. يتم أيضًا تضخيم أي RPO (المسبار الأيمن أوليغو) غير المرتبط في تفاعل MLPA ، حيث يمكن أن يرتبط التمهيدي العكسي بموقع الربط التمهيدي لـ RPO. ومع ذلك ، نظرًا لأن هذا RPO oligo غير المربوط يفتقر إلى موقع الربط للبرايم الأمامي (المسمى حاليًا) التمهيدي ، ينتهي التضخيم هنا. على النقيض من ذلك ، تحتوي المجسات المعلقة على موقع الربط لكل من البادئات ، وبالتالي يتم تضخيمها أضعافًا مضاعفة. علاوة على ذلك ، يتم دمج ملصق الفلورسنت فقط في الأمبليكون الذي ينتج من المسابير المربوطة.


أفترض أن قليل النوكليوتيد غير المرتبط سيتم "تضخيمه" أيضًا ولكن على نطاق أقل بكثير (؟ جزء واحد فقط من المسبار؟). على سبيل المثال بعد الجولة السادسة من تفاعل البوليميراز المتسلسل ، ستحصل على 2 ^ 6 = 64 أمبليكون من المسبار المربوط ولكن 6 فقط لجزء واحد غير مرتبط (تم تصميم البادئ الثاني ليحلل إلى الجزء الثاني من قليل النوكليتايد المضاد للتحسس؟). بعد 30 شوطًا ، يوجد اختلاف هائل يسمح لك فقط باكتشاف المسبار المربوط بشكل صحيح. لست متأكدًا مما إذا كنت على حق ولكن هكذا فهمت الأمر. سلام:)